Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) သည် ၎င်း၏ မြင့်မားသော throughput ရလဒ်များဖြင့် ကမ္ဘာကြီးကို တော်လှန်ပြောင်းလဲစေခဲ့သော တတိယမျိုးဆက် genome တည်းဖြတ်သည့် နည်းပညာတစ်ခုဖြစ်သည်။ ၎င်းကို ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာရောဂါများနှင့် ရောဂါပိုးများကို ကုသရန် အသုံးပြုခဲ့သည်။ ဘက်တီးရီးယားအမျိုးမျိုးနှင့် အခြား prokaryotes များ (ဥပမာ archaea) တွင် phages များကို ကာကွယ်ရန် CRISPR/Cas9 စနစ်များလည်း ရှိသည်။ CRISPR/Cas9-based ဗျူဟာများသည် ပြောင်းလဲနိုင်သော resistance genes၊ transcription နှင့် epigenetic regulation တို့ကို ပစ်မှတ်ထားခြင်းဖြင့် triple negative breast cancer (TNBC) ၏ ကြီးထွားမှုနှင့် တိုးတက်မှုကို ဟန့်တားနိုင်ကြောင်း သတင်းပို့ထားသည်။ ဤကုထုံးဆိုင်ရာ ကြားဝင်ဆောင်ရွက်မှုများသည် TNBC တွင်ပင် တွေ့ရှိရသည့် ဆေးဝါးခံနိုင်ရည်ရှိမှုကဲ့သို့သော စိန်ခေါ်မှုပြဿနာများကို ဖြေရှင်းရန် ကူညီပေးနိုင်ပါသည်။ လက်ရှိတွင် CRISPR/Cas9 ကို ပစ်မှတ်ဆဲလ်များထံ ပေးပို့ရန် နည်းလမ်းအမျိုးမျိုးကို အသုံးပြုကြပြီး ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာ (microinjection၊ electroporation နှင့် hydrodynamic modes)၊ ဗိုင်းရပ်စ် (adeno-associated virus နှင့် lentivirus) နှင့် ဗိုင်းရပ်စ်မဟုတ်သော (liposomes နှင့် lipid nanoparticles) ကဲ့သို့သော နည်းလမ်းများကို အသုံးပြုကြသည်။ TNBC ၏ မော်လီကျူးဆိုင်ရာ အကြောင်းရင်းများကို လေ့လာရန် မော်ဒယ်အမျိုးမျိုးကို တီထွင်ထားသော်လည်း၊ in vivo တွင် မျိုးရိုးဗီဇတည်းဖြတ်သည့်ကိရိယာများ ပေးပို့ရန် အာရုံခံနိုင်စွမ်းရှိပြီး ပစ်မှတ်ထားသောနည်းလမ်းများ မရှိခြင်းက ၎င်းတို့၏ ဆေးခန်းအသုံးချမှုကို ကန့်သတ်ထားသည်။ အကျဉ်းချုပ်အားဖြင့်၊ ဤသုံးသပ်ချက်သည် ရှိပြီးသားအထောက်အထားများအပေါ် အခြေခံ၍ TNBC အတွက် CRISPR/Cas9 ကုသမှု၏ တိုးတက်မှု၊ စိန်ခေါ်မှုများ၊ ကန့်သတ်ချက်များနှင့် အလားအလာများကို ပြည့်စုံစွာ စစ်ဆေးသည်။ TNBC ၏ကုသမှုတွင် ဉာဏ်ရည်တုနှင့် စက်သင်ယူမှုပေါင်းစပ်မှုသည် CRISPR/Cas9 ဗျူဟာများကို မည်သို့တိုးတက်ကောင်းမွန်စေနိုင်သည်ကို ကျွန်ုပ်တို့ မီးမောင်းထိုးပြပါသည်။
ကင်ဆာသည် မထိန်းချုပ်နိုင်သော ဆဲလ်ကွဲခြင်း၊ ဆဲလ်စက်ဝန်းစစ်ဆေးရေးဂိတ်များ ပျက်ယွင်းခြင်းနှင့် အကျိတ်နှိမ်နင်းရေးဂျင်း (TSGs) တွင် မျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုများဖြင့် သွင်ပြင်လက္ခဏာရှိသည် (Matthews et al., 2022)။ ကင်ဆာအမျိုးအစားအမျိုးမျိုးထဲတွင် ရင်သားကင်ဆာသည် အမျိုးသမီးများတွင် အဖြစ်အများဆုံးကင်ဆာအမျိုးအစားဖြစ်ပြီး ကမ္ဘာတစ်ဝှမ်းတွင် သေဆုံးမှုနှုန်းမြင့်မားသည် (Waks and Winer, 2019)။ ရင်သားကင်ဆာသည် တစ်ရှူးဗေဒနှင့် ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ လက္ခဏာများ၊ လက်တွေ့ပုံစံနှင့် အပြုအမူ၊ ကုသမှုအပေါ်တုံ့ပြန်မှုကဲ့သို့သော ကွဲပြားသောဝိသေသလက္ခဏာများပါရှိသော မတူညီသောရောဂါတစ်မျိုးဖြစ်သည် (Weigelt et al., 2010)။ ရင်သားကင်ဆာခွဲခြားခြင်းသည် ရင်သားကင်ဆာရောဂါရှာဖွေခြင်းနှင့် အကျိတ်ခန့်မှန်းချက်အတွက် တိကျသောထိုးထွင်းသိမြင်မှုများကို ပေးစွမ်းသည်။ ဘုံဇီဝအမှတ်အသားများနှင့် ဆေးခန်းဆိုင်ရာရောဂါဗေဒဆိုင်ရာ လက္ခဏာများကို အသုံးပြုခြင်းသည် ရင်သားကင်ဆာခွဲခြားမှုအတွက် အဓိကစံနှုန်းဖြစ်သည် (Tsang and Tse, 2019)။ ရင်သားကင်ဆာ၏ ခန့်မှန်းချက်နှင့် ကုသမှုအပေါ်တုံ့ပြန်မှုကို အီစထရိုဂျင် receptor (ER)၊ ပရိုဂျက်စတီရုန်း receptor (PR)၊ လူ့အရေပြားကြီးထွားမှုအချက် receptor 2 (HER2/neu) ရှိနေခြင်းနှင့် တစ်ရှူးဗေဒဆိုင်ရာအဆင့်၊ အကျိတ်အမျိုးအစားနှင့် အဆင့်အပါအဝင် အချက်များစွာက လွှမ်းမိုးမှုရှိသည်။ အရွယ်အစားနှင့် ပြန်ရည်ကျိတ်ပျံ့နှံ့မှု (Al-Tubaiti၊ ၂၀၂၀)။ ရင်သားကင်ဆာ၏ မော်လီကျူးမျိုးကွဲငါးမျိုးကို luminal A၊ luminal B၊ HER2-enriched၊ basal-like နှင့် claudin-low အပါအဝင် (Prat et al.၊ ၂၀၁၅) တွင် ဖော်ထုတ်နိုင်ခဲ့သည်။ TNBC သည် ER၊ PR နှင့် HER2 အားလုံးကို မဖော်ပြသော ကင်ဆာ၏ မော်လီကျူးမျိုးကွဲတစ်ခုဖြစ်သည် (Yin et al.၊ ၂၀၂၀)။ ဤရောဂါဗေဒဆိုင်ရာ လက္ခဏာများသည် TNBC နှင့် ဆက်စပ်နေပြီး ၎င်း၏ မြန်ဆန်သော တိုးတက်မှုနှင့် အခြားရင်သားကင်ဆာအမျိုးအစားများထက် ပိုမိုပြင်းထန်သော သဘောသဘာဝကို အတည်ပြုသည် (Feng et al.၊ ၂၀၁၈)။ ထို့အပြင်၊ Peru et al (၂၀၀၀) သည် ရင်သားကင်ဆာကို ပြန်လည်အမျိုးအစားခွဲခြားရန်နှင့် ရင်သားကင်ဆာ၏ intrinsic မျိုးကွဲငါးမျိုးကို ဖော်ထုတ်ရန် microarray နည်းပညာကို အသုံးပြုခဲ့သည် (Cadenas၊ ၂၀၁၂)။ Basal-like ရင်သားကင်ဆာသည် triple-negative phenotype ရှိပြီး မြန်ဆန်သော တိုးတက်မှုနှင့် ဆက်စပ်နေသော ရင်သားကင်ဆာ၏ မျိုးကွဲတစ်ခုဖြစ်သည်။ basal-like ရင်သားကင်ဆာအားလုံးကို TNBC အဖြစ် မှားယွင်းစွာ ရောဂါရှာဖွေလေ့ရှိသော်လည်း ၇၇% သာ TNBC ဖြစ်ကြောင်း သတိပြုသင့်သည်။ ဆန့်ကျင်ဘက်အနေဖြင့် TNBC ၏ ၇၁-၉၁% သည် basal-like ဖြစ်ပြီး ဤရင်သားကင်ဆာအမျိုးအစားနှစ်မျိုးသည် ထပ်တူကျပြီး ကွဲပြားသော အမျိုးအစားခွဲခြားမှုများကို ကိုယ်စားပြုကြောင်း ညွှန်ပြသည် (Wang D.-Y. et al., ၂၀၁၉)။ ၎င်းသည် ရောဂါခန့်မှန်းချက်ကို ရှင်းလင်းစွာဖော်ပြရန်နှင့် လက်ရှိနှင့် အနာဂတ်ကုသမှုများအပေါ် အလားအလာရှိသော တုံ့ပြန်မှုများကို ဖော်ထုတ်ရန်အတွက် TNBC ၏ မတူကွဲပြားမှုကို ဖော်ပြရန် လိုအပ်စေသည်။ ထို့အပြင် TNBC သည် ရင်သားကင်ဆာဖြစ်ပွားမှုအားလုံး၏ ၁၅-၂၀% ရှိပြီး အသက် ၅၀ အောက် အမျိုးသမီးများတွင် ပိုမိုအဖြစ်များသည်။ TNBC ဖြစ်ပွားမှု ၂၀% ခန့်တွင် BRCA1 သို့မဟုတ် BRCA2 မျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုများကို အစီရင်ခံတင်ပြထားသည် (Xie et al., ၂၀၁၇; Tzikas et al., ၂၀၁၇). , ၂၀၂၀)။ TNBC တွင် vascular endothelial growth factors၊ tumor-associated macrophages (TAMs)၊ tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) နှင့် tumor ကြီးထွားမှုနှင့် ရွှေ့ပြောင်းမှုတွင်ပါဝင်သော အခြားမော်လီကျူးများ မြင့်မားစွာပါဝင်သည့် ထူးခြားသော immune microenvironment တစ်ခုရှိကြောင်း လေ့လာမှုများက ပြသထားသည်။ ထို့ကြောင့် TNBC ၏ microenvironment ကို နားလည်ခြင်းသည် ၎င်း၏ ရောဂါခန့်မှန်းချက်နှင့် ကုသမှုအတွက် အလွန်အရေးကြီးပါသည် (Fan and He, 2022)။
TNBC ၏ ရောဂါခန့်မှန်းချက်ကို အကဲဖြတ်ရန်နှင့် ထိရောက်သောကုသမှုကို သေချာစေရန်အတွက် ER၊ PR နှင့် HER2 ကို ရှာဖွေရန် immunohistochemistry (IHC) ကို အဓိကအခြေခံ၍ တိကျသောရောဂါရှာဖွေခြင်းနှင့် ရင်သားကင်ဆာအကျိတ်များကို ရှာဖွေရန် mammography သည် အရေးကြီးပါသည်။ သို့သော် mammography သည် necrosis နှင့် fibrosis ကဲ့သို့သော intratumoral လက္ခဏာများကို လုံလောက်စွာ မဖော်ပြနိုင်ပါ (Deepak Singh et al., 2021)။ ရောဂါခန့်မှန်းချက်ညံ့ဖျင်းခြင်းနှင့် ရောဂါရှာဖွေခြင်းသည် ဆရာဝန်များအား မှန်ကန်သောဆေးဝါးများ ညွှန်ကြားခြင်းမှ တားဆီးထားသောကြောင့် (Chaudhary, 2020)၊ TNBC ရှိသောလူနာများအတွက် စောင့်ရှောက်မှုတိုးတက်စေရန် နည်းဗျူဟာအမျိုးမျိုးကို အသုံးပြုပါသည်။ လက်ရှိတွင် doxorubicin နှင့် cyclophosphamide ဟူသော ဆေးနှစ်မျိုးကို TNBC ရှိသောလူနာများတွင် အသုံးပြုပြီး ကောင်းမွန်သောရလဒ်များကို ပြသခဲ့သည်။ ထို့အပြင် carboplatin နှင့် cisplatin ကဲ့သို့သော အခြား platinum ဆေးများကို အသုံးပြုပါသည် (Sikov et al., 2015)။ ထို့အပြင် Olaparib၊ Velaparib နှင့် PF-01367338 ကဲ့သို့သော PARP inhibitors များကို TNBC ကုသရန်အတွက် အလားအလာရှိသော ဓာတုကုထုံးဆေးဝါးများအဖြစ် အသုံးပြုခဲ့ပါသည် (Ishino et al., 2018)။ Wnt/b-Catenin၊ NOTCH နှင့် Hedgehog အချက်ပြလမ်းကြောင်းများသည် TNBC ဖြစ်ပေါ်လာခြင်းနှင့် တိုးတက်ခြင်းတွင် ပါဝင်ပတ်သက်ကြောင်း သတင်းပို့ထားသောကြောင့်၊ ဤလမ်းကြောင်းများသို့ ဆေးဝါးများကို ပစ်မှတ်ထားခြင်းသည် အရေးကြီးသော ဗျူဟာတစ်ခု ဖြစ်နိုင်သည် (Aysola et al., 2013)။ ခွဲစိတ်ကုသမှု၊ ရောင်ခြည်ကုထုံးနှင့် ဓာတုကုထုံးတို့သည် ယနေ့ခေတ် TNBC အတွက် ကုသမှု၏ အဓိကအစိတ်အပိုင်းအဖြစ် ဆက်လက်တည်ရှိနေသော်လည်း၊ ပစ်မှတ်ထားကုထုံး၊ ကိုယ်ခံအားကုထုံး၊ Cas9n၊ dCas9၊ CRISPR/Cas12၊ prime editing နှင့် CRISPR/Cas9-ပစ်မှတ်ထား မျိုးဗီဇကုထုံးကဲ့သို့သော ကုသမှုအသစ်များ တီထွင်ရာတွင် သိသာထင်ရှားသော တိုးတက်မှုများရှိခဲ့သည်။ ဤနေရာတွင် TNBC ကုသမှုတွင် အသုံးပြုသော CRISPR နှင့် ဆက်စပ်သော မျိုးဗီဇတည်းဖြတ်သည့်ကိရိယာအမျိုးမျိုးကို အာရုံစိုက်ပါမည်။ ၎င်းတို့အနက် CRISPR/Cas9 သည် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့် အာရုံစိုက်မှုကို ရရှိခဲ့သည်။
Cas9n သို့မဟုတ် Cas9 nickase ဟုလည်း လူသိများသော Cas9 ပရိုတိန်းသည် CRISPR/Cas9 ဂျီနိုမ်တည်းဖြတ်စနစ်မှ ဆင်းသက်လာသော Cas9 ပရိုတိန်း၏ မျိုးရိုးဗီဇပြုပြင်ထားသော မျိုးကွဲတစ်ခုဖြစ်သည် (Gupta et al., 2019)။ ၎င်း၏ မူလပုံစံတွင် Cas9 ပရိုတိန်းတွင် nuclease domain နှစ်ခုပါဝင်သည်- RuvC နှင့် HNH၊ ၎င်း၏ အဓိကလုပ်ဆောင်ချက်မှာ DNA အမျှင်နှစ်ခုလုံးကို ဖြတ်တောက်ခြင်းဖြစ်သည်။ သို့သော် Cas9n တွင် nuclease domain တစ်ခုဖြစ်သော HNH သည် မျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုရှိပြီး အလုပ်မလုပ်တော့ပါ။ ထို့ကြောင့် Cas9n ၏ HNH domain သည် အလုပ်မလုပ်တော့ပါ။ RuvC domain တစ်ခုတည်းသာ အလုပ်ဖြစ်နေပြီး Cas9n သည် single DNA အမျှင်များတွင် အကွဲကြောင်းများကို ဖြတ်တောက်ခြင်း သို့မဟုတ် ဖန်တီးခြင်းပြုလုပ်နိုင်သည် (Trevino နှင့် Zhang၊ 2014)။ Cas9 နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက Cas9n သည် off-target effect များကို ထိရောက်စွာ လျှော့ချနိုင်ပြီး ဆဲလ်ပြုပြင်ခြင်းယန္တရားများကို တိကျစွာ တိုးတက်ကောင်းမွန်စေနိုင်သည်။ Cas9n ကို double-stranded DNA ရှိ သတ်မှတ်ထားသောနေရာများတွင် အကွဲကြောင်းများဖန်တီးခြင်းကဲ့သို့သော ပြဿနာအမျိုးမျိုးကို ဖြေရှင်းရန် အသုံးပြုနိုင်သည်။ ဤရည်ရွယ်ချက်အတွက် Cas9n မော်လီကျူးနှစ်ခုကို ပေါင်းစပ်ပြီး အတူတကွအသုံးပြုခဲ့သည် (Yee၊ 2016)။ ရောနှောထားသော lineage kinase 3 (MLK3) သည် TNBC metastasis အတွင်း အဓိက ထိန်းညှိပေးသူအဖြစ် ဆောင်ရွက်သော mitogen-activated protein kinase တစ်ခုဖြစ်သည် (Cronan et al., 2012)။
MLK3 သည် TNBC metastasis သို့ဦးတည်စေသော signaling pathways များစွာကို အသက်ဝင်စေနိုင်သည်။ ဥပမာအားဖြင့်၊ c-Jun N-terminal kinase (JNK) pathway သည် ဆဲလ်လှုပ်ရှားမှုနှင့် extracellular matrix degradation ကို ထိန်းညှိပေးပြီး MLK3 သည် JNK pathway ကို အသက်ဝင်စေပြီး ဆဲလ်လှုပ်ရှားမှုကို မြှင့်တင်ပေးပြီး invasive properties များကို ပေးစွမ်းသည် (Rattanasinchai and Gallo, 2016)။ MLK3 သည် EMT ကိုလည်း ထိန်းညှိပေးသည်။ ထိုသို့ပြုလုပ်ရန်အတွက် Snail၊ Slug နှင့် Twist ကဲ့သို့သော downstream transcription factors များကို အသက်ဝင်စေသည်။ ဤအချက်များသည် epithelial markers များ၏ expression ကို ဟန့်တားပြီး mesenchymal markers များ၏ expression ကို မြှင့်တင်ပေးပြီး metastatic phenotype ကို ရရှိစေတယ် (Casalino et al., 2023)။ MLK3 သည် ECM ကို ပြိုကွဲစေသော matrix metalloproteinases (MMPs) ကဲ့သို့သော proteases များ၏ ECM remodeling နှင့် activation တွင် အခန်းကဏ္ဍတစ်ခုမှ ပါဝင်ကြောင်း တွေ့ရှိရသည်။ ၎င်းသည် tumor cell ကျူးကျော်ဝင်ရောက်မှုနှင့် ဝေးလံသောနေရာများသို့ ပျံ့နှံ့မှုကို လွယ်ကူချောမွေ့စေသည် (Katari et al., 2019)။ ထို့ကြောင့်၊ ယခင်လေ့လာမှုများက MLK3 သည် TNBC တွင် အရေးကြီးသောအခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်ကြောင်း ပြသခဲ့သည်။ Rattanasinchai နှင့် Gallo တို့သည် MLK3 ၏ အခန်းကဏ္ဍကို လေ့လာရန် TNBC မော်ဒယ်များကို အသုံးပြုခဲ့ပြီး ၎င်းသည် သီးခြားအချက်ပြလမ်းကြောင်းများမှတစ်ဆင့် ကင်ဆာဖွံ့ဖြိုးမှုကို မြှင့်တင်ပေးသည်ကို တွေ့ရှိခဲ့သည်။ ၎င်းတို့သည် MLK3 ကို တည်းဖြတ်ရန် CRISPR/Cas9n ကိုအသုံးပြုခဲ့ပြီး TNBC metastasis တွင် သိသိသာသာ လျော့ကျသွားသည်ကို တွေ့ရှိခဲ့သည် (Rattanasinchai နှင့် Gallo၊ ၂၀၁၆)။
dCas9 ကို မကြာခဏ inactive Cas9 ဟုခေါ်လေ့ရှိပြီး Cas9 ပရိုတင်း၏ ပြုပြင်ထားသော derivative ပုံစံတစ်ခုဖြစ်သည်။ active Cas9 နှင့်မတူဘဲ dCas9 တွင် endonuclease လုပ်ဆောင်ချက်မရှိသောကြောင့် DNA double-strand break များကို မဖြစ်ပေါ်စေနိုင်ပါ။ ထို့ကြောင့် dCas9 ကို DNA sequence ကို မည်သည့်ပြောင်းလဲမှု သို့မဟုတ် ပြုပြင်မွမ်းမံမှုမျှမရှိဘဲ genome ၏ သီးခြားဒေသများကို တိကျစွာပစ်မှတ်ထားရန် အသုံးပြုနိုင်သည် (Wang et al., 2016)။ dCas9 တွင် endonuclease ပရိုတင်းနှစ်ခုဖြစ်သည့် RuvC နှင့် HNH တို့သည် အရေးကြီးသော amino acid အကြွင်းအကျန်များကို ဖိနှိပ်ခြင်းဖြင့် inactivated လုပ်ခံရသည်။ (Richter et al., 2016)။ DNA cleavage လုပ်ဆောင်ချက်မရှိသော်လည်း dCas9 သည် မျိုးရိုးဗီဇသုတေသနနှင့် ဇီဝနည်းပညာတွင် အရေးကြီးသောအခန်းကဏ္ဍများစွာမှ ပါဝင်သည်။ ဥပမာအားဖြင့်၊ ၎င်းသည် genome ၏ သီးခြားဒေသများကို မြင်ယောင်နိုင်စေပြီး၊ transcriptional regulation ကို လွယ်ကူချောမွေ့စေပြီး epigenetic ပြုပြင်မွမ်းမံမှုများကို မြှင့်တင်ပေးသည် (Brocken et al., 2018)။
transcription factor ZEB1 (zinc finger E-box binding homeobox 1) သည် သန္ဓေသားဖွံ့ဖြိုးမှု၊ တစ်ရှူးပြုပြင်ခြင်းနှင့် ကင်ဆာဖြစ်ပွားမှုအတွင်း ဖြစ်ပေါ်သည့် ဆဲလ်လုပ်ငန်းစဉ်တစ်ခုဖြစ်သည့် epithelial-mesenchymal transition (EMT) ကို ကြားဝင်ဆောင်ရွက်ပေးရာတွင် သီးခြားနှင့် အရေးကြီးသော အခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်သည်။ ၎င်းတွင် epithelial ဆဲလ်များကို mesenchymal ဆဲလ်များအဖြစ်သို့ ပြောင်းလဲခြင်းပါဝင်ပြီး ဆဲလ်ပုံသဏ္ဍာန်၊ ရွေ့လျားနိုင်မှု၊ ကျူးကျော်ဝင်ရောက်မှု စသည်တို့ကို ပြောင်းလဲစေသည် (Wu et al., 2020)။ ZEB1 သည် TNBC တွင် epithelial ဆဲလ်များ၏ ဆဲလ်-ဆဲလ် ကပ်ငြိမှုနှင့် polarity ကို ထိန်းသိမ်းရန် တာဝန်ရှိသော E-cadherin နှင့် Occludin ကဲ့သို့သော epithelial markers အများအပြားကို ဟန့်တားပေးသည် (Moreno-Bueno et al., 2008)။ ထို့အပြင်၊ ZEB1 သည် N-cadherin၊ vimentin နှင့် fibronectin ကဲ့သို့သော အချို့သော markers များကို အသက်ဝင်စေပြီး Rho GTPases နှင့် matrix metalloproteinases (MMPs) ကဲ့သို့သော cytoskeletal remodeling တွင်ပါဝင်သော မျိုးဗီဇများကိုလည်း ထိန်းညှိပေးသည် (Huang). et al., 2014). 2022), ထို့အပြင်၊ ၎င်းသည် transforming growth factor-β (TGF-β)၊ Wnt signaling စသည်တို့ကဲ့သို့သော signaling pathways အမျိုးမျိုးကိုလည်း သက်ရောက်မှုရှိပြီး၊ ထို့ကြောင့် TNBC တွင် tumor invasion နှင့် metastasis ကို မြှင့်တင်ပေးသည် (Chen et al., 2016). လေ့လာမှုများစွာနှင့် သိပ္ပံနည်းကျအထောက်အထားများအရ ZEB1 သည် TNBC ၏ ထောက်လှမ်းခြင်းနှင့် ကုထုံးဆိုင်ရာကြားဝင်ဆောင်ရွက်မှုအတွက် အဖိုးတန်အေးဂျင့်တစ်ဦးအနေဖြင့် အလားအလာကြီးမားကြောင်း ဖော်ပြသည်။ မကြာသေးမီက လေ့လာမှုတစ်ခုတွင် Waryah et al. သည် TNBC မော်ဒယ်ကို အသုံးပြုခဲ့ပြီး dCas9 ဖြင့် ZEB1 ကို လုံးဝနှိမ်နင်းနိုင်ခဲ့သည်။ ထို့ကြောင့်၊ ၎င်းတို့သည် in vivo အခြေအနေများတွင် ZEB1 ၏ အလွန်မြင့်မားသော specificity နှင့် လုံးဝနီးပါး တားဆီးမှုကို တွေ့ရှိခဲ့သည် (Waryah et al., 2023)။
CRISPR/Cas12 သည် CRISPR/Cpf1 ဟုခေါ်သော မျိုးဗီဇတည်းဖြတ်သည့်ကိရိယာတစ်ခုဖြစ်သည်။ ၎င်းကို CRISPR/Cas စနစ်မှ ဆင်းသက်လာပြီး Cas12 ဟူသော အသုံးအနှုန်းသည် CRISPR-associated protein 12 (Bharathkumar et al., 2022) ကို ရည်ညွှန်းပြီး Cas9 နှင့် လုံးဝဆင်တူသည်။ တစ်ခုတည်းသော ကွာခြားချက်မှာ ၎င်းတွင် Cas12 ပရိုတင်းပါဝင်ခြင်းဖြစ်သည်။ Cas9 နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက Cas12 တွင် မျိုးဗီဇတည်းဖြတ်သည့်လုပ်ငန်းစဉ်အတွင်း စေးကပ်သောအစွန်းများကို ထုတ်လုပ်ခြင်းကဲ့သို့သော ထူးခြားသောလုပ်ဆောင်ချက်အချို့ရှိပြီး Cas9 တွင် တုံးသောအစွန်းများကို ထုတ်လုပ်သည် (Wang et al., 2021)။ Cas12 ၏ ဤဂုဏ်သတ္တိသည် ၎င်း၏ သီးခြား DNA ကိုင်တွယ်မှုနည်းပညာကို ပံ့ပိုးပေးသည်။ ပစ်မှတ် DNA ကို တိကျစွာ မှတ်မိပြီး ဖြတ်တောက်နိုင်သော ပရိုတင်းတစ်ခုအနေဖြင့် ၎င်းသည် အလွန်စွယ်စုံရရှိပြီး မျိုးဗီဇတည်းဖြတ်ခြင်း (Pickar-Oliver and Gersbach, 2019) အပါအဝင် အသုံးချမှုအမျိုးမျိုးအတွက် ထိရောက်သောကိရိယာတစ်ခုဖြစ်စေသည်။
အခြား CRISPR မျိုးကွဲများနှင့်ဆင်တူစွာ၊ CRISPR/Cas12 သည် TNBC ရှိ မျိုးဗီဇများကို ခေါက်ထုတ်ခြင်း သို့မဟုတ် အသက်ဝင်စေခြင်းကိုလည်း ပြုလုပ်နိုင်ပြီး၊ ၎င်း၏ ရောဂါဖြစ်စဉ် သို့မဟုတ် ကုသမှုအပေါ် တုံ့ပြန်မှုတွင် အရေးကြီးသော အခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်သည့် မျိုးဗီဇများကို ပစ်မှတ်ထားနိုင်သည် (Yang နှင့် Zhang၊ ၂၀၂၃)။ ဤလုပ်ငန်းစဉ်ကို ပြီးမြောက်စေရန်အတွက်၊ Cas12 ကို ပစ်မှတ်မျိုးဗီဇသို့ လမ်းညွှန်ပေးသည့် လမ်းညွှန် RNA (gRNA) တစ်ခုကို တီထွင်ခဲ့သည်။ Cas12 သည် ၎င်း၏ပစ်မှတ်နှင့် ချိတ်ဆက်ပြီးသည်နှင့်၊ ၎င်းသည် DNA တွင် double-strand breaks များကို မိတ်ဆက်ပေးပြီး DNA ပြုပြင်ရေးယန္တရားများကို အသက်ဝင်စေသည်။ ပြုပြင်မှုလုပ်ငန်းစဉ်အတွင်း၊ မမှန်ကန်သော နျူကလီယိုတိုက်များ ပေါင်းစပ်နိုင်ပြီး မျိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုများနှင့် လုပ်ဆောင်ချက်ဆုံးရှုံးမှုများကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သည် (Zhang et al., ၂၀၂၁a)။ ထို့အပြင်၊ Cas12 အင်ဇိုင်း၏ တိုးတက်ကောင်းမွန်သော ဗားရှင်း (dCas12 ဟုခေါ်သည်) ကိုလည်း မျိုးဗီဇများကို အသက်ဝင်စေရန် အသုံးပြုခဲ့သည်။ ၎င်းကို transcription activator နှင့် ပေါင်းစပ်ခြင်းဖြင့် အချို့သော မျိုးဗီဇများကို လှုံ့ဆော်ပေးပြီး ၎င်းတို့ကို အသက်ဝင်စေနိုင်သည်။ ဤနည်းပညာသည် tumor suppressor မျိုးဗီဇများ၏ အသက်ဝင်မှုကို မြှင့်တင်ရာတွင် အလားအလာကြီးမားသည် (Sultan et al., ၂၀၂၂)။
Prime editing သည် မကြာသေးမီက တီထွင်ထားသော အလွန်သာလွန်ကောင်းမွန်သော genome editing နည်းပညာတစ်ခုဖြစ်သည်။ ၎င်းသည် သက်ရှိတစ်ခု၏ DNA ကို အလွန်တိကျစွာ ပြုပြင်နိုင်သည် (Chen နှင့် Liu၊ ၂၀၂၃)။ Prime editing ကို အဓိက အစိတ်အပိုင်းနှစ်ခု ပေါင်းစပ်ခြင်းဖြင့် ရရှိသည်- ပြုပြင်ထားသော CRISPR/Cas9 enzyme နှင့် reverse transcriptase။ CRISPR/Cas9 enzyme ၏ အခန်းကဏ္ဍမှာ genome ရှိ တိကျသောနေရာများကို ရွေးချယ်၍ ပစ်မှတ်ထားရန်ဖြစ်ပြီး reverse transcriptase သည် target location ရှိ DNA ကို သေချာစွာ ပြုပြင်ရန် ကူညီပေးသည် (Hassan et al., ၂၀၂၁)။ primer editing ယန္တရားတွင်၊ ပထမအဆင့်တွင် primer editing guide RNA (pegRNA) ဖန်တီးခြင်း ပါဝင်သည်။ ၎င်းတွင် target DNA ရှိ လိုချင်သော editing site နှင့် ကိုက်ညီသော target sequence နှင့် RNA template ပါဝင်သည်။ ထို့နောက် pegRNA ကို primer editing nuclease (PE2) နှင့်အတူ target cell များထဲသို့ ထည့်သွင်းသည်။ PE2 သည် Cas9 enzyme၊ reverse transcriptase နှင့် primer editing adapter တို့ပါဝင်သော fusion protein တစ်ခုဖြစ်သည် (Martín-Alonso et al., ၂၀၂၁)။ ဆဲလ်အတွင်းတွင် pegRNA နှင့် PE2 ဒြပ်ပေါင်းများသည် ၎င်းတို့ပြုပြင်လိုသော သီးခြား DNA ကို ရှာဖွေကြသည်။ Cas9 အင်ဇိုင်းသည် DNA ကို ဖြတ်တောက်ပြီး တစ်ခုတည်းသော ကြိုးများပါဝင်သော ပုံစံတစ်ခုကို ဖန်တီးသည် (Choi et al., 2022)။ Reverse transcriptase သည် ဤပုံစံကို အသုံးပြု၍ DNA ကို တည်းဖြတ်ရန် ပြင်ဆင်သည်။ DNA ကူးယူခြင်းနှင့်အတူ RNA ပုံစံကို တည်းဖြတ်ရန် ညွှန်ကြားချက်များကိုလည်း ထည့်သွင်းထားသည်။ နောက်ဆုံးတွင်၊ အသစ်ဖန်တီးထားသော DNA ကြိုးကို DNA ရှိ ကျိုးပဲ့မှုကို ပြုပြင်ရန် ပုံစံအဖြစ် အသုံးပြုပြီး လိုချင်သော ပြုပြင်မွမ်းမံမှုပါ၀င်သည့် ပြောင်းလဲထားသော DNA အစီအစဉ်တစ်ခုကို ဖြစ်ပေါ်စေသည် (Ochoa-Sanchez et al., 2021)။ Primer တည်းဖြတ်သည့် ယန္တရားများသည် မျိုးဗီဇများတွင် ကျယ်ပြန့်သော မျိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုများကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သည်။ ၎င်းသည် အမှတ် မျိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုများ၊ ထည့်သွင်းမှုများ၊ ဖျက်မှုများနှင့် မျိုးဗီဇအစားထိုးမှုများကိုပင် ပစ်မှတ်ထားနိုင်သည် (Anzalone et al., 2019; Chen နှင့် Liu, 2023)။ Prime တည်းဖြတ်ခြင်းသည် ယခင် မျိုးဗီဇတည်းဖြတ်သည့် နည်းပညာများထက် အားသာချက်များစွာကို ပေးစွမ်းသည်။ ၎င်းတို့တွင် တိကျမှု မြင့်မားလာခြင်း၊ ပစ်မှတ်မဟုတ်သော အကျိုးသက်ရောက်မှုများ လျော့နည်းလာခြင်းနှင့် DNA double-strand ကျိုးပဲ့မှုများကို မှီခိုစရာမလိုဘဲ DNA ကို တည်းဖြတ်နိုင်စွမ်းတို့ ပါဝင်သည်။ (Anzalone et al., 2020)
CRISPR/Cas9 နည်းပညာကို မူလက ဘက်တီးရီးယားများကို plasmid transfer နှင့် phage ကူးစက်မှုမှ ကာကွယ်ရန် တီထွင်ခဲ့ပြီး နောက်ပိုင်းတွင် genome တည်းဖြတ်ခြင်းအတွက် ထိရောက်သော RNA-based DNA targeting tool အဖြစ် ပြန်လည်အသုံးပြုခဲ့သည် (Jiang and Doudna, 2017)။ ထို့အပြင်၊ CRISPR/Cas9 စနစ်ကို ဘက်တီးရီးယားနှင့် archaeal genome များ၏ 50% နှင့် 87% အသီးသီးတွင် ရှိနေကြောင်း သတင်းပို့ထားသည် (Ishino et al., 2018)။ CRISPR/Cas9 သည် in vivo နှင့် in vitro mode များကို အသုံးပြု၍ ပုံမှန်မဟုတ်သော မျိုးရိုးဗီဇ sequence များကို ဖျက်ခြင်း၊ ထည့်သွင်းခြင်းနှင့် ပြုပြင်ခြင်းအတွက် အလားအလာရှိသော ကိရိယာတစ်ခုဖြစ်သည် (Sabit et al., 2021)။ ထို့အပြင်၊ CRISPR/Cas9 သည် စိတ်ဝင်စားဖွယ်ပစ်မှတ်ဂျင်းများအတွက် ၎င်း၏တိကျမှုကြောင့် adaptive immune system ၏ အစိတ်အပိုင်းတစ်ခုဖြစ်ကြောင်း ပြသထားသည် (Chen and Zhang, 2018)။
CRISPR/Cas9 တွင် Cas9 နှင့် single guide RNA (sgRNA) ပါဝင်သည်။ Cas9 သည် ပရိုတင်းအစိတ်အပိုင်းများစွာဖြင့် ဖွဲ့စည်းထားသော endonuclease တစ်ခုဖြစ်သည်။ ထို့အပြင်၊ Cas9 တွင် ထူးခြားသောဖွဲ့စည်းပုံနှင့် conformational ဂုဏ်သတ္တိများရှိသည် (Pacesa et al., 2022) ၎င်းတွင် lobes နှစ်ခုပါဝင်သည်- recognition (REC) နှင့် nuclease (NUC)။ REC lobe ကို ဒေသသုံးခုအဖြစ် ထပ်မံခွဲခြားထားသည်- REC1၊ REC2 နှင့် bridge helices (Cromwell et al., 2018)။ NUC တွင် lobes သုံးခုပါဝင်သည်၊ ၎င်းတို့မှာ RuvC (RuvC I၊ RuvC II၊ RuvC III)၊ HNH နှင့် protospacer adjacent motif (PAM) interaction domain (ပုံ ၁) (Song et al., 2016)။ sgRNA တွင် CRISPR RNA (crRNA) နှင့် transcoding small RNA (tracer RNA) အပါအဝင် အစိတ်အပိုင်းနှစ်ခုပါဝင်သည် (ပုံ ၁)။ sgRNA သည် Cas9 ပရိုတိန်းကို connexins များနှင့် ချိတ်ဆက်ပေးပြီး effector complex ဟုလည်းလူသိများသော active complex တစ်ခုဖွဲ့စည်းပေးသည် (Richter et al., 2012)။ crRNA သည် target DNA sequences များကို မှတ်မိရာတွင် အရေးပါသောအခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်သည့် 18–20 nucleotide base pair တစ်ခုဖြစ်သည်။ ထို့အပြင်၊ crRNA သည် target DNA နှင့် တွဲဖက်ပြီး tracrRNA သည် target DNA ကို ချိတ်ဆက်ရန် Cas9 nuclease အတွက် scaffold အဖြစ် လုပ်ဆောင်သည် (Manghwar et al., 2019)။ အခြားတစ်ဖက်တွင်၊ PAM sequence တွင် nucleotides ၃ ခုရှိပြီး effector complex ကို DNA နှင့် ချိတ်ဆက်ခြင်းကို အတည်ပြု၊ သတ်မှတ်ပြီး ကြားဝင်ပေးသည်။ Cas9 ပရိုတိန်း complex subunits RuvC နှင့် HNH တို့တွင် catalytic activity ရှိသည် (Richter et al., 2012; Asmamaw and Zawdie, 2021)။ Cas9 subunit ၏ HNH nuclease domain သည် crRNA နှင့် ဆက်စပ်နေသော DNA strand ကို ဖြတ်တောက်သည်။ RuvC nuclease domain သည် အခြား DNA အမျှင်များကို ဖြတ်တောက်ပြီး double-strand breaks (DSBs) ကို ထုတ်ပေးသည်၊ ထို့နောက်တွင် DNA break ပြုပြင်သည့် ယန္တရားနှစ်ခုကို အသက်ဝင်စေသည် (Jiang နှင့် Doudna၊ ၂၀၁၇) (ပုံ ၁)။
ပုံ ၁။ CRISPR/Cas9 အကျဉ်းချုပ် (A)။ CRISPR/Cas9 စနစ်၏ အစိတ်အပိုင်းများ- (i)။ Cas9 endonuclease သည် ပစ်မှတ် DNA အစီအစဉ်၊ (ii) crRNA နှင့် tra-crRNA chimeras များ ပေါင်းစပ်ခြင်းမှ ဖြစ်ပေါ်လာသော single guide (sg) RNA။ (နှစ်)။ Cas9 တွင် Rec I၊ Rec II၊ NUC lobe (HNH နှင့် Ruv C တို့သည် subcomponents များဖြစ်သည်) နှင့် သက်ဆိုင်ရာ function များပါရှိသော PAM interaction domain (C) ကဲ့သို့သော အစိတ်အပိုင်းများစွာ ပါဝင်သည်။ CRISPR/Cas9 ပရိုတိန်း complex သည် DNA အစီအစဉ်များကို non-complementary နှင့် complementary forms (D) အဖြစ်သို့ ပိုင်းခြားသည်။ CRISPR/Cas9 သည် genome ကို အဆင့်သုံးဆင့်ဖြင့် တည်းဖြတ်သည်- မှတ်မိခြင်း၊ ဖြတ်တောက်ခြင်းနှင့် ပြုပြင်ခြင်း။ ဒီဇိုင်းထုတ်ထားသော sg-RNA သည် Cas9 ကို လမ်းညွှန်ပြီး complementary component crRNA မှတစ်ဆင့် လိုချင်သော အစီအစဉ်အား မှတ်မိသည်။ Cas9 သည် 5′-NGG-3′ တွင် PAM အစီအစဉ်အား မှတ်မိပြီး DNA ကို အရည်ပျော်စေပြီး DNA-RNA hybrid ကို ဖွဲ့စည်းကာ cleavage ကို အသက်ဝင်စေသည်။ Cas9 ရဲ့ HNH domain က ဖြည့်စွက်ကြိုးကို ဖြတ်တောက်ပြီး RuvC domain က ဖြည့်စွက်မဟုတ်တဲ့ကြိုးကို ဖြတ်တောက်ပါတယ်။ CRISPR/Cas9 က dsDNA ကို နည်းလမ်းနှစ်မျိုးနဲ့ ဖြတ်တောက်ခြင်းဖြင့် ပြုပြင်ပေးပါတယ်- non-homologous end joining (NHEJ) နဲ့ homology-directed repair (HDR)။ NHEJ က enzymatic process တစ်ခုကနေတစ်ဆင့် foreign homologous DNA မရှိတဲ့အခါ double-stranded DNA ကို ပြုပြင်ပေးပါတယ်၊ ဒါက random DNA sequences တွေကို ထည့်သွင်းခြင်း သို့မဟုတ် ဖယ်ရှားခြင်း ပြုလုပ်နိုင်တဲ့ error ဖြစ်နိုင်ခြေရှိတဲ့ ယန္တရားတစ်ခုပါ။ HDR က အလွန်တိကျပြီး homologous DNA templates တွေ လိုအပ်ပါတယ်။
CRISPR/Cas9-mediated ပြုပြင်ရေးလမ်းကြောင်းများတွင် non-homologous end joining (NHEJ) နှင့် homology-directed repair (HDR) ယန္တရားများ ပါဝင်သည်။ NHEJ သည် ထည့်သွင်းခြင်း သို့မဟုတ် ဖျက်ခြင်းပါဝင်ပြီး ပြုပြင်ရေးယန္တရားအတွင်း မည်သည့်ပုံစံမျှ မလိုအပ်သောကြောင့် အမှားအယွင်းများသော လမ်းကြောင်းတစ်ခုဖြစ်သည်။ ၎င်းသည် စံပရိုတင်းများထုတ်လုပ်ရန် ကျပန်းနျူကလီယိုတိုက်များကို အသုံးပြုသည် (Abbasi et al., 2021)။ ဤပြုပြင်ရေးစနစ်တွင် KU complex၊ cross-complementing protein complex type 4 (XRCC-4)၊ DNA end processing enzyme နှင့် protein kinase DNA-PKcs (Abbasi et al., 2021) ကဲ့သို့သော complex လေးခုပါဝင်သည်။ KU complex ပရိုတိန်းတွင် Ku 70 နှင့် Ku 80 ဟူ၍ subunits နှစ်ခုရှိပြီး NHEJ ယန္တရားတွင် အရေးကြီးသောအခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်ပါသည်၊ အဘယ်ကြောင့်ဆိုသော် ပြုပြင်ရေးယန္တရားသည် subunits နှစ်ခု (Ku 70 နှင့် Ku 80) ကို target DNA ၏ တုံးသော သို့မဟုတ် တုံးသလောက် အဆုံးများနှင့် ချိတ်ဆက်ခြင်းဖြင့် စတင်ပြီး (Abbasi et al., 2021)၊ အခြား NHEJ နှင့် ဆက်စပ်သောအချက်များကို ဒဏ်ရာနေရာသို့ စုဆောင်းရန် scaffold အဖြစ် ဆောင်ရွက်ပေးသောကြောင့်ဖြစ်သည် (Yang et al., 2020)။ XRCC-4 နှင့် DNA ligase တို့သည် အသီးသီး amino acid ၃၃၄ ခုနှင့် ၉၁၁ ခုဖြင့် ဖွဲ့စည်းထားပြီး XRCC4-DNA ligase IV complex သည် DNA အဆုံးများ၏ ligation ကို လှုံ့ဆော်ပေးသည် (Chatterjee et al., 2015)။ polynucleotide kinase 3′-phosphate ဟုလည်း လူသိများသော DNA အဆုံးလုပ်ဆောင်သည့် အင်ဇိုင်းသည် DNA အဆုံးလုပ်ဆောင်သည့် အင်ဇိုင်းတစ်ခုဖြစ်သည်။ ၎င်းသည် DSB ပြုပြင်နေစဉ်အတွင်း DNA ရှိ 3′P အုပ်စုကို ဖယ်ရှားနိုင်ပြီး 5′OH အုပ်စုကို phosphorylate လုပ်နိုင်သည်။ ၎င်းတွင် SSB ပြုပြင်ရေးလမ်းကြောင်းကို အသုံးပြု၍ single-strand breaks (SSBs) များကို ပြုပြင်ခြင်းလည်း ပါဝင်သည် (Chatterjee et al., 2015)။ Protein kinase DNA-PKcs သည် DNA-dependent protein kinase တစ်ခုဖြစ်ပြီး၊ PIKKs (phosphatidylinositol 3-kinase-related kinases) နှင့် ataxia telangiectasia mutated (ATM) မိသားစု၏ catalytic subunit အပြင် ATM နှင့် Rad3-related ATRs၊ strand breaks (DSBs) နှင့် single-strand breaks (Yue et al., 2020; Peng et al., 2016) တို့ပါဝင်သည်။
HDR သည် ပိုမိုတိကျပြီး သင့်လျော်သော ပြုပြင်မှုယန္တရားတစ်ခုဖြစ်ပြီး homologous DNA duplex ၏ မပျက်စီးသောပုံစံကို အသုံးပြု၍ အချက်အလက်များကို ကူးယူထားသော်လည်း ညီအစ်မ chromatids များရှိနေရန် လိုအပ်ပါသည်။ ၎င်းသည် နို့တိုက်သတ္တဝါဆဲလ်စက်ဝန်း၏ S/G2 အဆင့်တွင် ဖြစ်ပေါ်ပါသည်။ HDR သည် yeast မျိုးစိတ်များတွင် အဓိကအားဖြင့် ဖြစ်ပေါ်သော်လည်း NHEJ သည် နို့တိုက်သတ္တဝါများတွင် အရေးကြီးပါသည် (Burma et al., 2006; Abbasi et al., 2021)။ ပြုပြင်မှုယန္တရားအပြည့်အစုံကို ပုံ ၁ တွင် ပြသထားသည်။
TNBC သည် မျိုးရိုးဗီဇနှင့် မျိုးရိုးဗီဇပြင်ပ မူမမှန်မှုများကြောင့် ဖြစ်ပေါ်လာသောကြောင့် CRISPR/Cas9 ကို အသုံးပြု၍ malignant genomic/epigenomic မူမမှန်မှုများကို ပြုပြင်ခြင်းသည် ကျိုးကြောင်းဆီလျော်သော ကုထုံးနည်းလမ်းတစ်ခု ဖြစ်နိုင်သည် (Chen et al., 2019)။ ထို့အပြင်၊ ဆဲလ်တစ်ခုချင်းစီ၏ မှတ်တမ်းပြုစုခြင်း ထိန်းညှိမှုတွင် ပါဝင်သော မှတ်တမ်းပြုစုခြင်းဆိုင်ရာ အချက်အချို့သည် ကင်ဆာဆဲလ်များ၏ ထူးခြားသော ဝိသေသလက္ခဏာများကို ပြသနိုင်ပြီး၊ မှတ်တမ်းပြုစုခြင်း ထိန်းညှိမှုသည် ကင်ဆာကုသမှုအတွက် အလွန်ကောင်းမွန်သော ချဉ်းကပ်မှုတစ်ခု ဖြစ်နိုင်ကြောင်း အကြံပြုထားသည် (Drost et al., 2017)။ ဆေးဝါးဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုအတွက် မျိုးရိုးဗီဇ၊ မှတ်တမ်းပြုစုခြင်းနှင့် မှတ်တမ်းပြုစုခြင်း ချို့ယွင်းချက်များကဲ့သို့သော အကျိတ်များ၏ ဤမော်လီကျူးဆိုင်ရာ အင်္ဂါရပ်များကို အသုံးချခြင်းသည် ဆေးခန်းရလဒ်များကို တိုးတက်ကောင်းမွန်စေပြီး စစ်ဆေးခြင်းကုန်ကျစရိတ်များကို လျှော့ချနိုင်သည်။ CRISPR သည် ကင်ဆာဖြစ်စေသော မျိုးရိုးဗီဇပစ်မှတ်များကို ရှာဖွေတွေ့ရှိဖော်ထုတ်နိုင်ရုံသာမက လူ့ဆဲလ်များရှိ အွန်ကိုဂျင်းများကို တည်းဖြတ်ခြင်း၊ နှိမ်နင်းခြင်းနှင့် မျိုးရိုးဗီဇပြင်ပ မူမမှန်မှုများကို ပြုပြင်မွမ်းမံခြင်းအတွက်လည်း အသုံးပြုနိုင်သည် (ဇယား ၁) (Ahmed et al., 2021)။ အကျိတ်နှိမ်နင်းပေးသောပစ္စည်းများ၊ အွန်ကိုဂျင်းများနှင့် ဆေးယဉ်ပါးမှုများနှင့် ဆက်စပ်နေသော မျိုးရိုးဗီဇများကို ရှာဖွေရန် CRISPR စစ်ဆေးမှုများစွာကို ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ TNBC oncogenes အမျိုးမျိုးကို တည်းဖြတ်ရန် CRISPR/Cas9 ကိုအသုံးပြုခြင်းကို ပုံ ၂ တွင်ပြထားသည်။
ပုံ ၂။ CRISPR/Cas9 ကို အသုံးပြု၍ TNBC အွန်ကိုဂျင်းအမျိုးမျိုး၏ မျိုးဗီဇတည်းဖြတ်ခြင်းသည် အကျိတ်ကြီးထွားမှုနှင့် ကင်ဆာပျံ့နှံ့မှုကို လျော့နည်းစေသည်။ ဤအွန်ကိုဂျင်းများတွင် CDK7၊ NAT1၊ UBR5၊ YTHDF2၊ ITGA9၊ CXCR4 နှင့် CXCR7၊ Crypto1၊ ROR1 နှင့် ST8SIA တို့ပါဝင်ပြီး ၎င်းတို့သည် TNBC ဖြစ်ပေါ်မှုနှင့် ကင်ဆာပျံ့နှံ့မှုတွင် ပါဝင်ပါသည်။
ကင်ဆာဆဲလ် ရွှေ့ပြောင်းခြင်း၊ ကျူးကျော်ဝင်ရောက်ခြင်းနှင့် epithelial-mesenchymal transition (EMT) တို့သည် ITGA9 နှင့် ဆက်စပ်နေပါသည်။ ယခင်လေ့လာမှုများအရ ITGA9 သည် Notch လမ်းကြောင်းတွင် အဓိကကစားသမားတစ်ဦးဖြစ်ပြီး rhabdomyosarcoma metastasis တွင် စိတ်ဝင်စားဖွယ်အခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်ကြောင်း ပြသထားသည် (Molist et al., 2020)။ ထို့အပြင်၊ ITGA9 သည် ရင်သားကင်ဆာအပါအဝင် အကျိတ်အမျိုးအစားများစွာတွင် လူနာ၏ရောဂါခန့်မှန်းချက်နှင့် နီးကပ်စွာဆက်စပ်နေကြောင်း တွေ့ရှိခဲ့သည် (Wang Z. et al., 2019)။ ထို့အပြင်၊ ITGA9 ၏ ဇီဝသတင်းအချက်အလက်ဆိုင်ရာ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအရ TNBC တွင် ၎င်း၏ဖော်ပြမှုသည် အခြားရင်သားကင်ဆာမျိုးကွဲများထက် သိသိသာသာမြင့်မားကြောင်း ပြသခဲ့သည်။ ITGA9 အဆင့်မြင့်မားခြင်းသည် TNBC လူနာများတွင် အကျိတ် metastasis နှင့် ပြန်လည်ဖြစ်ပွားမှုနှင့် ဆက်စပ်နေသည်။ CRISPR/Cas9 မှ ITGA9 ကို knockout လုပ်ခြင်းသည် ကင်ဆာ stem cell (CSC) ကဲ့သို့သော ဂုဏ်သတ္တိများ၊ tumor angiogenesis၊ tumor growth နှင့် TNBC တွင် β-catenin degradation ကို မြှင့်တင်ခြင်းဖြင့် metastasis လျော့နည်းစေသည် (Wang Z. et al., 2019)။
Crypto-1 သည် TGF-β မိသားစုဝင်တစ်ဦးဖြစ်ပြီး အစောပိုင်း သန္ဓေသားဖွံ့ဖြိုးမှု၊ ပင်မဆဲလ်ထိန်းသိမ်းမှုနှင့် ကင်ဆာ metastasis အတွက် အရေးပါသည် (Ishii et al., 2021)။ Tdgf-1 အဖြစ်လည်း လူသိများသော ၎င်းသည် primitive streak၊ mesoderm နှင့် endoderm ဖွဲ့စည်းမှုကို ထိန်းညှိပေးသည့်အပြင် embryogenesis အတွင်း ခန္ဓာကိုယ်အင်္ဂါများ ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် ဘယ်/ညာ asymmetry တည်ဆောက်ခြင်းတွင် ပါဝင်သော oncogenic GPI-anchored signaling protein တစ်ခုဖြစ်သည် (Zhang et al., 2021b)။ ထို့အပြင်၊ Cripto-1 သည် ပင်မဆဲလ်အမှတ်အသားတစ်ခုအနေဖြင့် epithelial-mesenchymal transition (EMT) တွင် ပါဝင်ကြောင်း ပြသထားသည် (Zhang et al., 2021b)။ EMT သည် သန္ဓေသားဖွံ့ဖြိုးမှု၊ fibrosis နှင့် အနာကျက်ခြင်းကဲ့သို့သော လုပ်ငန်းစဉ်အမျိုးမျိုးအတွက်သာမက ကင်ဆာကျူးကျော်ဝင်ရောက်မှုနှင့် metastasis အတွက်လည်း အရေးပါသည်။ ထို့အပြင်၊ Cripto-1 သည် Notch receptors လေးခုနှင့် အပြန်အလှန် ဆက်သွယ်ပြီး ၎င်းတို့၏ post-translational maturation ကို မြှင့်တင်ပေးကြောင်း ပြသထားသည် (Brandstadter and Maillard, 2019)။ Notch အချက်ပြလမ်းကြောင်းသည် လူ့ရင်သားကင်ဆာဆဲလ်များ ထိန်းသိမ်းခြင်းတွင် ပါဝင်ပတ်သက်ကြောင်း လူသိများသည်။ လေ့လာမှုများအရ Crypto-1 ၏ CRISPR/Cas9 မှတစ်ဆင့် knockout သည် ကင်ဆာကြီးထွားမှုနှင့် metastasis ကို နှိမ်နင်းပေးသည်ဟု ပြသထားသည်။ ထို့ကြောင့် Crypto-1 သည် TNBC အတွက် အရေးကြီးသော ကုထုံးပစ်မှတ်တစ်ခု ဖြစ်လာနိုင်သည် (Castro et al., 2015)။
XCL12 ပရိုတိန်းနှင့် ၎င်း၏ chemokine receptor CXC (CXCR4 နှင့် CXCR7) သည် ကင်ဆာဆဲလ်များ ပွားများခြင်း၊ ကြီးထွားခြင်း၊ ရွှေ့ပြောင်းခြင်းနှင့် ကျူးကျော်ခြင်းတွင် အခန်းကဏ္ဍအမျိုးမျိုးမှ ပါဝင်ပါသည် (Wu et al., 2015)။ ဤ chemoreceptors များသည် in vivo နှင့် in vitro မော်ဒယ်နှစ်မျိုးလုံးတွင် အချက်ပြလမ်းကြောင်းများစွာမှတစ်ဆင့် TNBC ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုနှင့် ဆက်စပ်နေပါသည် (Wu et al., 2015)။ ထို့အပြင်၊ CXCR4 နှင့် CXCR7 ကို အသက်ဝင်စေခြင်းသည် TNBC တွင် metastasis ကို ပိုမိုထိခိုက်လွယ်ခြင်းနှင့် prognosis ညံ့ဖျင်းခြင်းတို့နှင့် ဆက်စပ်နေပါသည် (Karn et al., 2022)။ ထို့ကြောင့်၊ CXCR4 နှင့် CXCR7 ကို knockout လုပ်ခြင်းသည် TNBC အပါအဝင် ရင်သားကင်ဆာကုသမှုအတွက် ထိရောက်သော ဆေးဝါးပစ်မှတ်ဂျင်းများ ဖြစ်လာနိုင်ပါသည်။ Yang et al. Yang et al (2019) ၏ လေ့လာမှုတွင် CXCR4 နှင့် CXCR7 မျိုးဗီဇများကို ပူးတွဲ knock out လုပ်ရန် CRISPR/Cas9 ကိုအသုံးပြုခဲ့ပြီး TNBC ပွားများခြင်း၊ ကြီးထွားခြင်း၊ ရွှေ့ပြောင်းခြင်းနှင့် ကျူးကျော်ခြင်းတို့ကို သိသိသာသာ တားဆီးထားကြောင်း တွေ့ရှိခဲ့သည် (Yang et al., 2019)။
TNBC oncogene တစ်မျိုးဖြစ်သည့် miR-3662 ပမာဏ မြင့်တက်လာခြင်းကို ရင်သားကင်ဆာတစ်ရှူးများတွင် တွေ့ရှိခဲ့ရသည် (Yi et al., 2022)။ miR-3662 ကို ဖြုတ်ချခြင်းသည် in vivo နှင့် in vitro နှစ်ခုလုံးတွင် ရင်သားကင်ဆာအကျိတ်ကြီးထွားမှုနှင့် metastasis ကို ဟန့်တားနိုင်ကြောင်း ပြသထားသည် (Agarwal and Gupta, 2021)။ HBP-1 သည် Wnt/-catenin အချက်ပြမှုကို အစွမ်းထက်သော inhibitor တစ်ခုဖြစ်ပြီး miR-3662 မှတဆင့် TNBC ဆဲလ်များ၏ ကြီးထွားမှုအတွက် တာဝန်ရှိဖွယ်ရှိသည်။ မကြာသေးမီက Yi et al. သည် miR-3662-HBP1 ဝင်ရိုးသည် TNBC ဆဲလ်များတွင် Wnt/-catenin အချက်ပြလမ်းကြောင်းကို ထိန်းညှိပေးကြောင်း တွေ့ရှိခဲ့သည် (Yi et al., 2022)။ ၎င်း၏ tumor-specific expression ကြောင့် miR-3662 သည် TNBC အတွက် အလားအလာရှိသော therapeutic target တစ်ခု ဖြစ်နိုင်သည်။ ထို့ကြောင့် miR-3662 ကို CRISPR/Cas9 မှတဆင့် ဖြုတ်ချခြင်းသည် TNBC ကို ကုသရန် ဆေးဝါးအသစ်များ တီထွင်ရန်အတွက် အလွန်ကောင်းမွန်သော ချဉ်းကပ်မှုတစ်ခု ဖြစ်နိုင်သည်။
UBR5 သည် 300 kDa nucleophosphoprotein တစ်ခုဖြစ်ပြီး ကင်ဆာရောဂါအမျိုးမျိုးတွင် အကျိတ်ဖြစ်ပေါ်မှု၊ ကင်ဆာပျံ့နှံ့မှုနှင့် ကိုယ်ခံအားတုံ့ပြန်မှုတို့၏ အဓိကထိန်းညှိပေးသူအဖြစ် ဖော်ထုတ်ထားသည် (Shearer et al., 2015; Fu et al., 2023)။ UBR5 သည် TNBC နမူနာများတွင် အလွန်အမင်း မြင့်တက်လာပြီး ၎င်း၏ ubiquitin ligase လုပ်ဆောင်ချက်မှတစ်ဆင့် ပွားများမှုကို လှုံ့ဆော်ပေးခြင်းဖြင့် ERα လုပ်ဆောင်ချက်ကို လှုံ့ဆော်ပေးသည်ဟု သတင်းပို့ထားသည် (Bolt et al., 2015)။ မူလ TNBC နမူနာများ၏ Whole exome sequencing လေ့လာမှုများအရ UBR5 ၏ ဖော်ပြမှု တိုးလာမှုကိုလည်း ပြသခဲ့ပြီး TNBC ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် ၎င်း၏ အခန်းကဏ္ဍကို အကြံပြုထားသည်။ ထို့အပြင်၊ UBR5 ၏ CRISPR/Cas9-driven ဖျက်ခြင်းသည် စမ်းသပ်မောက်စ်မော်ဒယ်များတွင် TNBC ကင်ဆာပျံ့နှံ့မှုနှင့် ကြီးထွားမှုကို သိသိသာသာ ဟန့်တားကြောင်း ပြသခဲ့သည်။ ထို့အပြင်၊ wild-type မောက်စ်မော်ဒယ်တွင် UBR5 ပါဝင်ခြင်းသည် ၎င်း၏ အပြည့်အဝ လုပ်ဆောင်နိုင်စွမ်းကို ပြန်လည်ရရှိစေသော်လည်း ဤအကျိုးသက်ရောက်မှုကို inactivated mutant မျိုးကွဲများတွင် မတွေ့ရှိရပါ (Liao et al., 2017)။ UBR5 မရှိခြင်းသည် angiogenesis ညံ့ဖျင်းခြင်းကြောင့် TNBC တွင် apoptosis၊ necrosis တိုးလာခြင်းနှင့် အကျိတ်ကြီးထွားမှုကို ဟန့်တားခြင်းတို့နှင့် ဆက်စပ်နေသည်။ UBR5 ဆုံးရှုံးမှုကြောင့် ဝေးလံသော ကိုယ်တွင်းအင်္ဂါများသို့ အကျိတ်ပျံ့နှံ့မှု လျော့နည်းသွားပြီး UBR5 သည် E-cadherin expression ကို လျှော့ချခြင်းဖြင့် ပုံမှန်မဟုတ်သော EMT ကို အဓိကဖြစ်ပေါ်စေသည် (Zhang နှင့် Weinberg၊ ၂၀၁၈)။ မကြာသေးမီက UBR5 သည် E3 ubiquitination activity မရှိခြင်းကြောင့် TNBC တွင် IFN-γ-induced PDL1 transcription တွင် အလွန်အရေးကြီးသောအချက်ဖြစ်ကြောင်း ပြသခဲ့သည်။ RNA transcriptome ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအရ UBR5 သည် IFN-γ လမ်းကြောင်းနှင့် ဆက်စပ်နေသော မျိုးဗီဇများအပေါ် စနစ်တကျအကျိုးသက်ရောက်မှုများရှိပြီး protein kinase RNA (PKR) နှင့် ၎င်း၏ signal transducers နှင့် activators များ၏ activation အဆင့်များကို တိုးမြှင့်ခြင်းဖြင့် PDL1 transactivation ကို မြှင့်တင်ပေးနိုင်ကြောင်း၊ transcription 1 (STAT1) နှင့် interferon regulatory factor 1 (IRF1) တို့ကို လှုံ့ဆော်ပေးကြောင်း ဖော်ပြသည်။ သို့သော်၊ UBR5 နှင့် PD-L1 ဖော်ပြမှုကို CRISPR/Cas9 ကြားဝင်ပေါင်းစပ် ablation သည် ပိတ်ဆို့ခြင်းတစ်ခုတည်းထက် ပေါင်းစပ်ကုထုံးဆိုင်ရာအကျိုးသက်ရောက်မှုရှိပြီး အကျိတ် microenvironment ကို နက်ရှိုင်းစွာအကျိုးသက်ရောက်မှုရှိသည် (Wu et al., 2022)။ ထို့ကြောင့်၊ CRISPR/Cas9 သည် UBR5 လုပ်ဆောင်ချက်ကို ဟန့်တားရန် အရေးကြီးသောကိရိယာတစ်ခု ဖြစ်နိုင်ပြီး TNBC metastasis နှင့် အကျိတ်ကြီးထွားမှုကို ဖိနှိပ်ပေးသည်။
ROR1 သည် ကင်ဆာနှင့် သန္ဓေသားဖွံ့ဖြိုးမှုတွင် ဖော်ပြသော အမျိုးအစား I transmembrane ပရိုတိန်းတစ်ခုဖြစ်ပြီး oncofetal ပရိုတိန်းအဖြစ် ဖော်ထုတ်ခဲ့သည် (Nicholas Borcherding, 2014)။ လူသားကင်ဆာအမျိုးမျိုး၏ ကျူးကျော်ဝင်ရောက်မှုအပြုအမူသည် ROR1 မြင့်တက်လာခြင်းနှင့် ဆက်စပ်နေသည်။ ROR1 ကို ပစ်မှတ်ထားသော ကုထုံးဆိုင်ရာဒြပ်ပေါင်းများပါဝင်သည့် in vivo နှင့် in vitro လေ့လာမှုများမှ မျှော်လင့်ချက်ကောင်းသောရလဒ်များ ရရှိခဲ့သည် (Chien et al., 2016)။ ရင်သားတစ်ရှူးဇီဝစစ်ဆေးမှုများတွင် ROR1 mRNA ပမာဏမြင့်မားခြင်းသည် ရန်လိုသော basal-like breast (BL) အကျိတ်များနှင့် ခန္ဓာကိုယ်၏ အခြားအစိတ်အပိုင်းများသို့ ရွှေ့ပြောင်းခြင်းနှင့်လည်း ဆက်စပ်နေသည်။ ထို့အပြင်၊ ROR1 အလွန်အကျွံဖော်ပြခြင်းကို TNBC ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုအတွက် ခန့်မှန်းချက်အမှတ်အသားတစ်ခုအဖြစ် ဖော်ထုတ်ခဲ့သည် (Chien et al., 2016)။ သို့သော်၊ TNBC ကြီးထွားမှုနှင့် metastasis ကို နှိမ်နင်းရန် CRISPR/Cas9 ကို အသုံးပြု၍ ROR1 ကို တိတ်ဆိတ်စေခြင်းသည် ထိရောက်သောဗျူဟာတစ်ခုဖြစ်သည်။
sialylation လုပ်ငန်းစဉ်တွင် sialic acid ကို glycoconjugates ထဲသို့ထည့်သွင်းခြင်းပါဝင်ပြီး ၎င်းကို sialyltransferases (STs) မှ ဓာတ်ကူပေးသည်။ ST8SIA1 သည် ST မိသားစုတွင်ပါဝင်ပြီး lymphocytic leukemia နှင့် colorectal cancer ကဲ့သို့သော ရောဂါအမျိုးမျိုး၏ pathogenesis တွင် အရေးကြီးသောအခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်သည် (Chang et al., 2018)။ RNA sequence analysis အရ ST8SIA1 သည် TNBC လူနာများ၏ ရင်သားတစ်ရှူးတွင် များစွာဖော်ပြပြီး TNBC ၏ pathogenesis တွင် ပါဝင်နိုင်သည့် tumor suppressor gene p53 ရှိ mutations နှင့် အပြုသဘောဆက်စပ်နေကြောင်းပြသသည် (Battula et al., 2017)။ ထို့အပြင်၊ ST8SIA1 သည် TNBC ၏ metastasis နှင့် recurrence တွင်ပါဝင်ပတ်သက်ပြီး ၎င်းသည် TNBC ဖြစ်ပေါ်ခြင်းနှင့် ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် အရေးကြီးသောအခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်ကြောင်း အကြံပြုသည်။ TNBC ၏ in vitro မော်ဒယ်တွင် CRIPSR/Cas9 မှ ST8SIA1 ကို knockdown လုပ်ခြင်းသည် ကြီးထွားမှုနှင့် metastasis ကို ပိတ်ဆို့ကြောင်းပြသခဲ့သည် (Battula et al., 2017)။ ဒါကြောင့် CRISPR/Cas9 ဟာ TNBC ကုသမှုမှာ ST8SIA1 oncogene ရဲ့ လုပ်ဆောင်ချက်ကို ဟန့်တားဖို့အတွက် အရေးကြီးတဲ့ကိရိယာတစ်ခု ဖြစ်နိုင်ကြောင်း အကြံပြုထားပါတယ်။
NAT1 သည် အဆင့် II xenobiotic ဒြပ်ပေါင်းများဖွဲ့စည်းခြင်းကို အရှိန်မြှင့်ပေးပြီး လူ့တစ်ရှူးအားလုံးနီးပါးတွင် ဖော်ပြသည့် ဇီဝဖြစ်စဉ်ဆိုင်ရာ အင်ဇိုင်းတစ်ခုဖြစ်သည်။ NAT1 သည် aromatic amine substrate မရှိသည့်တိုင် acetyl-CoA (acetyl-CoA) ကို ပစ်မှတ်ထားရန် cofactor folate ကို အသုံးပြုနိုင်သည် (Stepp et al., 2015; Laurieri et al., 2014)။ လေ့လာမှုများအရ NAT1 သည် ရင်သားကင်ဆာဆဲလ်မော်ဒယ်များတွင် matrix metalloproteinase 9 (MMP9) လုပ်ဆောင်ချက်ကို ထိန်းညှိပေးပြီး glucose ငတ်မွတ်ခေါင်းပါးမှုအတွင်း reactive oxygen species (ROS) မှ ကာကွယ်ပေးကြောင်း ပြသထားသည် (Wang et al., 2018)။ NAT1 ကို ဖျက်ခြင်းသည် pyruvate dehydrogenase complex ကို ဟန့်တားပြီး mitochondrial dysfunction ကို ဖြစ်စေကြောင်း ပြသထားသည် (Wang L. et al., 2019)။ ထို့အပြင်၊ အခြားအစီရင်ခံစာများစွာတွင် မော်လီကျူးငယ်များကို အသုံးပြု၍ NAT1 ဟန့်တားခြင်းနှင့် siRNA silencing သည် ရင်သားကင်ဆာဆဲလ်များ၏ ကျူးကျော်ဝင်ရောက်မှုနှင့် မျိုးပွားမှုကို လျှော့ချနိုင်ကြောင်း ပြသထားသည် (Stepp et al., 2018)။ မကြာသေးမီက CRISPR/Cas9 ကို ရင်သားကင်ဆာဆဲလ်မျိုးစိတ် MDA-MB-231 ရှိ NAT1 ကို နှိမ်နင်းရန် အသုံးပြုခဲ့ပြီး ၎င်း၏ဖော်ပြမှုအဆင့်ပေါ် မူတည်၍ ဆဲလ်ဇီဝြဖစ်ပျက်မှုကို သက်ရောက်မှုရှိသည်။ ဤလေ့လာမှုတွင် NAT-1 သည် TNBC ၏ တိုးတက်မှုနှင့် metastasis အတွက် အရေးပါကြောင်းလည်း ပြသခဲ့သည် (Carlisle et al., 2020)။
အွန်ကိုဂျင်းများ၏ ညှိနှိုင်းထားသော ကူးယူမှုကို super enhancers၊ transcription factors နှင့် cofactors များက ထိန်းညှိပေးသည် (Hnisz et al., 2015)။ ထို့အပြင်၊ CDK7၊ CDK8၊ CDK9၊ CDK12 နှင့် CDK13 ကဲ့သို့သော cyclin-dependent kinases (CDKs) အုပ်စုသည် ကူးယူမှုထိန်းညှိမှုအတွက် လိုအပ်ပါသည်။ ၎င်းတို့အနက် CDK7 သည် RNA polymerase II ၏ phosphorylation တွင် ပါဝင်ပတ်သက်ပြီး TNBC ၏ pathogenesis တွင် အွန်ကိုဂျင်းကူးယူမှု၏ အစပြုခြင်းနှင့် ချဲ့ထွင်ခြင်းအတွက် အလွန်အရေးကြီးပါသည်။ seminal လေ့လာမှုတစ်ခုတွင် CRISPR/Cas9 မှ CDK7 ကို ဖျက်ခြင်းသည် TNBC ကို တားဆီးခဲ့ပြီး TNBC ၏ pathogenesis သည် CDK7 မှီခိုကြောင်း ညွှန်ပြသည် (Wang Y. et al., 2015)။
MYC နှင့် RBP (RNA ချိတ်ဆက်ပရိုတင်း) ရှိ မျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုများသည် apoptosis ကို ဖြစ်စေနိုင်သော်လည်း MYC သို့မဟုတ် RBP ရှိ မျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုတစ်ခုတည်းသည် ကင်ဆာဆဲလ်များ၏ ကြီးထွားမှုကို မထိခိုက်ကြောင်း လေ့လာမှုများက ပြသထားသည် (Einstein et al., 2021)။ လူ့မျိုးရိုးဗီဇရှိ RBP ၁၀၀၀ ကျော်ကို CRISPR/Cas9-based library ကို အသုံးပြု၍ စစ်ဆေးခဲ့သည်။ ၎င်းတို့အနက် RBP ၅၇ ခုသည် မြင့်မားသော MYC အဆင့်ရှိသော ကင်ဆာဆဲလ်များ၏ ကြီးထွားမှုအတွက် အရေးပါကြောင်း တွေ့ရှိခဲ့သည် (Wheeler et al., 2020)။ ထို့အပြင်၊ YTHDF2 သည် TNBC ဆဲလ်ကြီးထွားမှုကို ထိန်းသိမ်းရန်အတွက် အရေးကြီးပြီး MYC ဖော်ပြမှုမြင့်မားသော ကင်ဆာဆဲလ်များတွင် အဆင့်မြင့် မျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုနှင့် ဘာသာပြန်ဆိုချက်အတွင်း မီသိုင်းဓာတ်ပါဝင်သော မှတ်တမ်းများပမာဏကို လျော့ကျစေသည်။ ထို့အပြင်၊ YTHDF2 သည် ကင်ဆာဆဲလ်များအတွက် မရှိမဖြစ်လိုအပ်သည်မဟုတ်ဘဲ၊ TNBC လူနာများ၏ ရှင်သန်မှုကို ရှည်ကြာစေရန် မြင့်မားသော MYC အဆင့်များအပေါ် မှီခိုမှုနည်းပါးသည် (Einstein et al., 2021)၊ ၎င်းသည် TNBC ကို ကျော်လွှားနိုင်သော ဆေးဝါးများအတွက် အလားအလာရှိသော ကုထုံးပစ်မှတ်တစ်ခု ဖြစ်နိုင်ကြောင်း အကြံပြုထားသည်။
ဇင့်လက်ချောင်းပရိုတင်းများ (ZNFs) သည် လူ့မျိုးရိုးဗီဇစုစုပေါင်း၏ ၁% ခန့်ရှိသည်။ ZNF သည် အသည်းကင်ဆာ၊ ရင်သားကင်ဆာနှင့် အူမကြီးကင်ဆာကဲ့သို့သော ကင်ဆာအမျိုးမျိုးတွင် ဆဲလ်ပွားများမှုကို ထိန်းညှိပေးနိုင်ကြောင်း လေ့လာမှုများက ပြသထားသည် (Zhang W. et al., 2021; Li et al., 2017)။ CRISPR knockout မှထုတ်လုပ်သော စာကြည့်တိုက်များကို ရင်သားကင်ဆာဆဲလ်များရှိ အကျိတ်နှိမ်နင်းရေး မျိုးဗီဇ (TSGs) အမျိုးမျိုးကို စစ်ဆေးရန် အသုံးပြုခဲ့သည် (Shalem et al., 2014)။ ထိုအချိန်မှစ၍ CRISPR/Cas9 ZNF319 ဖျက်လိုက်သော ရင်သားကင်ဆာဆဲလ်များ၏ transcriptomic လေ့လာမှုတစ်ခုက ZNF319 သည် ရင်သားကင်ဆာပွားများမှုကို လျော့ကျစေပြီး ထို့ကြောင့် ဖြစ်နိုင်ချေရှိသော အချက်ပြမှုယန္တရားများနှင့် အခြားဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ လုပ်ဆောင်ချက်အမျိုးမျိုးတွင် ပါဝင်ပတ်သက်သည့် အကျိတ်နှိမ်နင်းရေး မျိုးဗီဇတစ်ခုဖြစ်ကြောင်း ပြသခဲ့သည် (Wang L. et al., 2022)။
Ferroptosis ဆိုသည်မှာ သံဓာတ်ရှိနေခြင်းအပေါ် မူတည်သည့် ပရိုဂရမ်ထည့်သွင်းထားသော ဆဲလ်သေဆုံးမှု အမျိုးအစားတစ်ခုဖြစ်သည်။ ferroptosis ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုသည် lipid peroxides ရှိနေခြင်းကြောင့် သက်ရောက်မှုရှိကြောင်း သိရှိရပါသည်။ ထို့အပြင်၊ PKCβII သည် lipid peroxidation အစောပိုင်းတွင် ပြသကြောင်း သတင်းပို့ထားပြီး lipid peroxidation မြင့်တက်လာခြင်းသည် ferroptosis နှင့် ဆက်စပ်နေပါသည်။ CRISPR/Cas9-mediated kinase inhibitors စာကြည့်တိုက်ကို စစ်ဆေးကြည့်ခြင်းအားဖြင့် PKCβII သည် lipid peroxidation လုပ်ငန်းစဉ်တွင် ပါဝင်ပတ်သက်နေပြီး၊ ၎င်းသည် MDA-MB-231 ဆဲလ်များတွင် ferroptosis အတွက် အရေးကြီးကြောင်း တွေ့ရှိခဲ့သည် (Zhang et al., 2022)။ ထို့ကြောင့်၊ ဤသည်မှာ CRISPR/Cas9 မှ PKCβII ကို ဖြုတ်ချခြင်းသည် ferroptosis နှင့်ဆက်စပ်သော ရောဂါများကို ကုသရန်အတွက် အလားအလာရှိသော tumor suppressor gene target တစ်ခု ဖြစ်နိုင်ကြောင်း အကြံပြုထားသည် (Zhang et al., 2022)။
ဆေးဝါးယဉ်ပါးမှုသည် ကင်ဆာလူနာများတွင် သေဆုံးမှု ၉၀% ခန့်အတွက် တာဝန်ရှိသည်ဟု ယုံကြည်ရပြီး ကင်ဆာကုသမှုတွင် အဓိကစိန်ခေါ်မှုများထဲမှ တစ်ခုဖြစ်သည် (Bukowski et al., 2020)။ ရလဒ်များအရ ဆေးဝါးစိမ့်ဝင်မှု၊ DNA ပြုပြင်မှု၊ apoptosis နှင့် ဆဲလ်အချက်ပြမှုလမ်းကြောင်းအမျိုးမျိုးနှင့် ဆက်စပ်နေသော မျိုးဗီဇအလုံအလောက်သည် ဆေးဝါးယဉ်ပါးမှုနှင့် ဆက်စပ်နေကြောင်း ညွှန်ပြသည် (Haider et al., 2020)။ ၎င်းတို့အနက် မျိုးဗီဇအများအပြားကို CRISPR/Cas9 ကိရိယာများဖြင့် ပစ်မှတ်ထားပြီး ဆေးဝါးယဉ်ပါးမှုကို လျှော့ချခြင်းနှင့် ကင်ဆာတိုက်ဖျက်ရေးကုသမှုများ၏ ထိရောက်မှုကို မြှင့်တင်ခြင်းတွင် အလားအလာကောင်းသော ရလဒ်များကို ပြသခဲ့သည် (Vaghari-Tabari et al., 2022)။ ထို့အပြင်၊ စွမ်းဆောင်ရည်မြင့်မားသော CRISPR/Cas9 မျိုးဗီဇ knockout စစ်ဆေးရေးစာကြည့်တိုက်များသည် အလားအလာရှိသော ဆေးဝါးယဉ်ပါးမှု မျိုးဗီဇပစ်မှတ်များ၏ လုပ်ဆောင်ချက်ကို ပြုပြင်မွမ်းမံရာတွင် ပါဝင်ပတ်သက်ခဲ့သည် (Shalem et al., 2015)။ paclitaxel ခံနိုင်ရည်ရှိသော မျိုးဗီဇများကို ဖော်ထုတ်ရန်အတွက်၊ RNA sequencing နှင့် genome-wide sgRNA library screening တို့ကို အသုံးပြု၍ ထပ်တလဲလဲ TNBC ရှိသော လူနာများတွင် ဆေးဝါးခံနိုင်ရည်ရှိမှုနှင့် ဆက်စပ်နေသော histone deacetylase 9 (HDAC9) အပါအဝင် မျိုးဗီဇရှစ်မျိုးကို ဖော်ထုတ်ရန် အသုံးပြုခဲ့သည် (B et al., 2020)။ အခြားလေ့လာမှုတစ်ခုတွင်၊ ကင်ဆာဆေးဝါးများဖြင့် ကုသခံယူထားသော TNBC လူနာများ၏ ရှင်သန်မှုကာလအတွင်း diserine/threonine နှင့် tyrosine protein kinase (DSTYK) ၏ ဖော်ပြမှု တိုးလာသည်ကို တွေ့ရှိခဲ့သည်။ ထို့အပြင်၊ CRISPR/Cas9 မှတစ်ဆင့် DSTYK ၏ knockdown သည် in vitro တွင် ဆေးဝါးခံနိုင်ရည်ရှိသော ကင်ဆာဆဲလ်များ (SUM102PT ဆဲလ်များနှင့် MDA-MB-468 ဆဲလ်များ) နှင့် in vivo TNBC မော်ဒယ် (Ogbu et al., 2021) တို့၏ apoptosis ကို သိသိသာသာ မြှင့်တင်ပေးခဲ့သည်။
TNBC တွင် MAPK လမ်းကြောင်း၏ ပုံမှန်မဟုတ်သော အသက်ဝင်မှု ရှိသော်လည်း MEK-ပစ်မှတ်ထား ကုထုံးများ၏ လက်တွေ့အကျိုးသက်ရောက်မှုမှာ ညံ့ဖျင်းပါသည်။ CRISPR/Cas9 genomic library screen မှ PSMG2 (proteome assembly chaperone 2) ကို ဟန့်တားခြင်းသည် TNBC BT549 နှင့် MB468 ဆဲလ်များကို MEK inhibitor AZD6244 ကို အာရုံခံနိုင်စွမ်းရှိကြောင်း ဖော်ထုတ်ခဲ့သည်။ PSMG2 ၏ CRISPR/Cas9 ပြုတ်ကျခြင်းသည် ပုံမှန် proteasome လုပ်ဆောင်ချက်ကို ပြောင်းလဲစေပြီး PDPK1 ၏ autophagy-mediated disassembly ကို ဖြစ်ပေါ်စေကာ AZD6244 (MEK inhibitor) နှင့် MG132 (proteasome inhibitor) မှ လှုံ့ဆော်ပေးသော TNBC mouse model များတွင် tumor ဆဲလ်များကို ပိုမိုတိုးတက်ကောင်းမွန်စေပါသည်။ ထို့ကြောင့် tumor cell ပွားများမှုကို လျှော့ချရန် proteasome နှင့် MAP kinase (MEK) inhibitors များကို synergistically ပေးနိုင်ပါသည် (Wang X. et al., 2022)။
CRISPR/Cas9 ကို TNBC ခုခံမှုဖြစ်စေသော မျိုးဗီဇလုပ်ဆောင်ချက်ဆုံးရှုံးမှုကို စစ်ဆေးရန်အတွက်လည်း အသုံးပြုခဲ့သည် (Shu et al., 2020)။ Ge နှင့်အဖွဲ့သည် TNBC တွင် BET bromodomain inhibitor (BBDI) JQ1 ဖြင့် ကုသထားသော ကင်ဆာဆဲလ်များ၏ ဆေးခံနိုင်ရည်ရှိမှု ယန္တရားကို ရှင်းပြခဲ့သည်။ CRISPR/Cas9 ကိုအသုံးပြုခြင်းဖြင့် rb1 မျိုးဗီဇကို ဖျက်လိုက်ခြင်းသည် TNBC သည် ကင်ဆာဆန့်ကျင်ဆေး JQ1 ကို ခံနိုင်ရည်ရှိလာစေကြောင်း ၎င်းတို့တွေ့ရှိခဲ့ကြသည်။ ထို့ကြောင့် TNBC တွင် JQ1 ဆေးဝါးများအပေါ် တုံ့ပြန်မှုတွင် rb1 လုပ်ဆောင်ချက်သည် အရေးကြီးပါသည်။ paclitaxel သည် CDK4/6 kinase/microtubule inhibitor တစ်ခုဖြစ်ပြီး JQ1 ကဲ့သို့သော BBDI များနှင့် ပေါင်းစပ်ခြင်းသည် ဆေးခံနိုင်ရည်ရှိသော TNBC အတွက် မျှော်လင့်ချက်ကောင်းသော ကုထုံးဆိုင်ရာတုံ့ပြန်မှုများကို ပေးစွမ်းနိုင်ကြောင်း ၎င်းတို့က ဖော်ပြခဲ့သည် (Ge et al., 2020)။
ရှည်လျားသော noncoding RNA (lncRNA) ၏ transcriptional landscape သည် TNBC တွင် neoadjuvant ကုထုံးကို ခံနိုင်ရည်ရှိခြင်းအတွက် တာဝန်ရှိသည်ဟု သတင်းပို့ထားသည်။ ဤလေ့လာမှုက MALAT1 lncRNA transcripts ငါးခုသည် TNBC တွင် အလွန်အမင်းဖော်ပြနေကြောင်း ပြသသည်။ ထို့အပြင်၊ MALAT1 ၏ CRISPR/Cas9-mediated ဖျက်ခြင်းသည် TNBC BT-549 ဆဲလ်များ၏ paclitaxel နှင့် doxorubicin အပေါ် အာရုံခံနိုင်စွမ်းကို တိုးစေပြီး TNBC တွင် MALAT1 ခံနိုင်ရည်ရှိမှုအတွက် အလားအလာရှိသော အခန်းကဏ္ဍကို အကြံပြုသည် (Shaath et al., 2021)။
BRCA1 (BRCA1m) ရှိ မျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုများသည် မတူညီသောကြောင့် ရှာဖွေရန် ခက်ခဲပါသည်။ BRCA1 ၏ ဓာတုဗေဒနည်းဖြင့် သေစေနိုင်သော အဖော်ဖြစ်သော PARP1 (poly(ADP-ribose) polymerase ကို ပစ်မှတ်ထားခြင်းသည် TNBC ဆေးဝါးများ၏ ဓာတုကုထုံးဆိုင်ရာ တုံ့ပြန်မှုကို တိုးစေနိုင်သည်။ CRISPR/Cas9 ကိုအသုံးပြုခြင်းဖြင့် PARP1 ကို ဖျက်လိုက်ခြင်းသည် doxorubicin၊ gemcitabine နှင့် docetaxel ကဲ့သို့သော ကင်ဆာဆန့်ကျင်ဆေးများသည် mBRCA1 မျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှု TNBC ဆဲလ်များအပေါ် အာရုံခံနိုင်စွမ်းကို တိုးစေပြီး PARP1 သည် TNBC တွင် ဆေးဝါးခံနိုင်ရည်ရှိမှုတွင်လည်း ပါဝင်ကြောင်း အကြံပြုသည် (Vaghari-Tabari et al., 2022)။ . BRCA1 သို့မဟုတ် BRCA2 ကင်ဆာဆန့်ကျင်ရေး မျိုးရိုးဗီဇများတွင် မျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုများသည် လူများတွင် ရင်သားကင်ဆာဖြစ်ပွားနိုင်ခြေကို တိုးစေသည်ဟု လူသိများသည်။ ဤလူနာများကို ကုသရာတွင် PARP inhibitors များကို အသုံးပြုရန် လိုအပ်ပါသည်။ ထို့အပြင်၊ CRISPR/Cas9 ကို အသုံးပြု၍ nucleotide salvage factor DNPH1 ကို knockout လုပ်ခြင်းသည် အဆိပ်သင့် nucleotide 5-hydroxymethyldeoxyuridine (hmdU) monophosphate ကို ဖယ်ရှားနိုင်ကြောင်း သက်သေပြခဲ့ပြီး၊ ထို့ကြောင့် BRCA ချို့တဲ့သောဆဲလ်များ၏ PARP inhibitors များအပေါ် sensitivity တုံ့ပြန်မှုကို မြှင့်တင်ပေးသည် (Fugger). et al., 2021). ထို့ကြောင့်၊ CRISPR/Cas9 နှင့် PARP1 inhibitors များသည် TNBC အတွက် အရေးကြီးသော ကုသမှုဗျူဟာတစ်ခု ဖြစ်လာနိုင်သည်။
ထိုးဖောက်ဝင်ရောက်နိုင်သော glycoprotein (P-gp) မျိုးဗီဇသည် TNBC အားလုံး၏ ၄၁% ခန့်တွင် ယေဘုယျအားဖြင့် မြင့်တက်လာသော ဆေးဝါးမျိုးစုံခံနိုင်ရည်ရှိသော မျိုးဗီဇတစ်ခုဖြစ်သည် (Sun et al., 2020)။ P-gp ကြောင့်ဖြစ်ပေါ်လာသော ဆေးဝါးများ စိမ့်ထွက်ခြင်းကို ရင်သားကင်ဆာတွင် ဆေးဝါးခံနိုင်ရည်ရှိမှု၏ အဓိကထိန်းညှိပေးသူအဖြစ် ဖော်ထုတ်ခဲ့သည်။ P-gp inhibitors များသည် ရင်သားကင်ဆာတွင် ကင်ဆာဆန့်ကျင်ဆေးများအပေါ် အာရုံခံနိုင်စွမ်း မြင့်တက်လာကြောင်း သက်သေပြခဲ့သည် (Famta et al., 2021)။ ထို့ကြောင့် P-gp နှင့် P-gp inhibitors များ၏ CRISPR/Cas9-mediated ablation သို့မဟုတ် suppression သည် TNBC တွင် ဆေးဝါးခံနိုင်ရည်ရှိမှုကို ကျော်လွှားရန် အလွန်အရေးကြီးသော နည်းလမ်းများ ဖြစ်နိုင်သည်။
ATP-binding cassette transporter G2 (ABCG2) သည် TNBC တွင် ဆေးယဉ်ပါးမှုကို ဖြစ်စေသည်ဟု သိရှိထားသော်လည်း (Palasuberniam et al., 2015)၊ CRISPR/Cas9 နှင့် ABCG2 silencing နှင့် tumor suppressor gene inactivation အကြား ဆက်နွယ်မှုအကြောင်း အစီရင်ခံစာများ လောလောဆယ်တွင် မရှိသေးပါ။ PTEN သည် ABCG2 activation ကို မြှင့်တင်ပေးနိုင်သည် (Palasuberniam et al., 2015)၊ (Deepak Singh et al., 2021)။ ထို့ကြောင့် ABCG2 ကို ဖယ်ရှားရန် CRISP/Ca9 ကို အသုံးပြုပြီး ABCG2 inhibitor နှင့် ပေါင်းစပ်ခြင်းသည် TNBC တွင် ဆေးယဉ်ပါးမှုကို ကျော်လွှားရန် သင့်လျော်သော ကုသမှုတစ်ခု ဖြစ်နိုင်သည်။ ဇယား ၂ တွင် CRISPR/Cas9 သည် ခုခံမှုဂျင်းအားလုံးကို ပစ်မှတ်ထားကြောင်း ဖော်ပြထားသည်။
ဇယား ၂။ CRISPR/Cas9 သည် ကင်ဆာဆန့်ကျင်ဆေးများကို ဆဲလ်များ အာရုံခံနိုင်စွမ်းရှိစေရန် TNBC ခုခံမှုဂျင်းအမျိုးမျိုးကို ပစ်မှတ်ထားသည်။
CRISPR/Cas9 စာကြည့်တိုက်များသည် ကင်ဆာဖြစ်ပွားမှုနှင့် ဆက်စပ်နေသော မျိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုများကို စစ်ဆေးရန်အတွက် အလားအလာရှိသော ကိရိယာများဖြစ်သည် (Chan et al., 2022)။ ဤစစ်ဆေးခြင်းနည်းလမ်းတွင် (က) စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်ခြင်း၊ (ခ) lentiviral transduction၊ (ဂ) phenotypic စစ်ဆေးခြင်းနှင့် (ဃ) target gene analysis ကဲ့သို့သော အဆင့်လေးဆင့်ပါဝင်သည်။ TNBC တွင် MAPK လမ်းကြောင်း၏ ပုံမှန်မဟုတ်သော activation ရှိသော်လည်း PTEN၊ RB1 နှင့် TP53 ကဲ့သို့သော tumor suppressor gene များတွင် mutations ရှိသော TNBC လူနာများအတွက် MEK ပစ်မှတ်ထားကုထုံး၏ လက်တွေ့ခန့်မှန်းချက်မှာ အလွန်ညံ့ဖျင်းပါသည်။
ထို့အပြင်၊ CRISPR/Cas9 ကို အသုံးပြုသည့် မျိုးရိုးဗီဇ ပြုတ်ကျခြင်း စစ်ဆေးခြင်းတွင် ဂွာတီမာလာ ပန်းနှင့် အရွက် ထုတ်ယူမှုများတွင် ပေါများသော အစွမ်းထက်ဆုံးနှင့် ရွေးချယ်မှု အရှိဆုံး မော်လီကျူးဖြစ်သည့် dehydrocatrol ကို စမ်းသပ်ခဲ့ပြီး၊ dehydrocatrol သည် MDA-MB-231 အပေါ် သက်ရောက်မှုကို နားလည်ခဲ့သည်။ ရွေးချယ်ထားသော ဆဲလ် ဆိုက်တိုအဆိပ်သင့်ခြင်း၏ ယန္တရားများ။ TNBC မျိုးကွဲများ၏ Mesenchymal stemness ဝိသေသလက္ခဏာများ။ ဤ CRISPR/Cas9-အခြေပြု စစ်ဆေးခြင်းတွင် 17β-hydroxysteroid dehydrogenase အမျိုးအစား 11 ကို ကုဒ်သွင်းသည့် မျိုးရိုးဗီဇ HSD17B11 သည် MDA-MB-231 ဆဲလ်များတွင် များစွာဖော်ပြပြီး MDA-MB-231 ဆဲလ်များအတွက် သီးခြား dehydrofalcarinol ကို ဖြစ်ပေါ်စေကြောင်းလည်း ဖော်ပြခဲ့သည် (Grant et. al., 2020)။ ထို့ကြောင့်၊ ၎င်းသည် CRISPR/Cas9 မျိုးရိုးဗီဇ စစ်ဆေးခြင်းသည် အလားအလာရှိသော သဘာဝဒြပ်ပေါင်းများ၏ ကင်ဆာဆန့်ကျင်ဂုဏ်သတ္တိများ၏ အခြေခံယန္တရားများကို ဖော်ထုတ်ရာတွင် အလားအလာကြီးမားကြောင်း အကြံပြုထားသည်။
ထို့အပြင်၊ TNBC ၏ ကင်ဆာအပေါ် အားနည်းချက်ကို ဘက်မလိုက်သော genome-wide in vivo CRISPR/Cas9 screen ကို အသုံးပြု၍ လေ့လာခဲ့ပြီး၊ oncogenic နှင့် tumor suppressor pathways များအကြား ဆက်စပ်မှုကို ပြသခဲ့သည်။ mTOR နှင့် Hippo pathways များ၏ အဓိက အစိတ်အပိုင်းများသည် TNBC တွင် tumor ထိန်းညှိမှုတွင် အရေးကြီးသော အခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်ကြောင်း သတင်းပို့ထားသည်။ ထို့အပြင်၊ လေ့လာမှုများအရ mTORC1/2 နှင့် YAP oncoprotein ၏ ဆေးဝါးဗေဒဆိုင်ရာ တားဆီးမှုသည် in vitro drug-matrix synergy model နှင့် in vivo patient-derived xenografts များကို အသုံးပြု၍ TNBC ၏ pathogenicity ကို ထိရောက်စွာ တားဆီးပေးကြောင်း ပြသခဲ့သည်။ ထို့အပြင်၊ Torin-1-mediated mTORC1/2 inhibition သည် macropinocytosis ကို မြှင့်တင်ပေးပြီး verteporfin-induced YAP inhibition သည် TNBC ဆဲလ်သေဆုံးမှုကို ဖြစ်စေသည်။ ပေါင်းစပ်ကြည့်လျှင်၊ ဤရလဒ်များသည် TNBC အတွက် ထူးခြားပြီး ထိရောက်သော ကုသမှုများကို ဖော်ထုတ်ရန် genome-wide in vivo CRISPR screening ၏ စွမ်းအားနှင့် တည်ငြိမ်မှုကို မီးမောင်းထိုးပြသည် (Dai et al., 2021)။
ကိုယ်ခံအားစနစ် ထိန်းညှိမှု ချို့ယွင်းခြင်းသည် အကျိတ်ဖြစ်ပေါ်မှုတွင် အရေးကြီးသောအချက်တစ်ခုဖြစ်သည်။ ကင်ဆာဆဲလ်များသည် အကျိတ်အဏုဇီဝပတ်ဝန်းကျင်ရှိ ကိုယ်ခံအားဆဲလ်များ၏ လုပ်ဆောင်ချက်ကို အနှောင့်အယှက်ဖြစ်စေခြင်းနှင့် ကိုယ်ခံအားစနစ်ကို ထိခိုက်စေခြင်းအပါအဝင် ကာကွယ်ရေးယန္တရားများကို ကျော်လွှားခြင်းဖြင့် ကိုယ်ခံအား ရှင်းလင်းမှုကို ရှောင်ရှားကြသည်။ ထို့ကြောင့် ကိုယ်ခံအားစနစ် ပိုမိုကောင်းမွန်လာစေရန် ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်စေခြင်းသည် အကျိတ်များကို တိုက်ဖျက်ရန် အဓိကချဉ်းကပ်မှုတစ်ခု ဖြစ်နိုင်သည်။ CRISPR/Cas9-အခြေခံ မျိုးဗီဇပြုပြင်မွမ်းမံခြင်းကို အသုံးပြုခြင်းသည် ကိုယ်ခံအား ချို့ယွင်းမှုနှင့် ဆက်စပ်သော ပြဿနာများစွာကို မတူညီသော ရှုထောင့်များမှ ကိုင်တွယ်ဖြေရှင်းပေးသည်။ CRISPR/Cas9 ကို အောက်ပါလမ်းကြောင်းများမှတစ်ဆင့် ရင်သားကင်ဆာကို ကင်ဆာဆန့်ကျင်သည့် ကိုယ်ခံအားကို တိုးတက်စေရန် အသုံးပြုခဲ့သည် (ပုံ ၃)။
ပုံ ၃။ CRISPR/Cas9 ကိုယ်ခံစွမ်းအားကုထုံးသည် TNBC ဆဲလ်များကို ပစ်မှတ်ထားသည်။ CDK5 ဆုံးရှုံးမှုနှင့် PDL1 နှင့် CD155 ဖြိုခွဲခြင်းသည် ကိုယ်ခံအားစနစ်ကို မြှင့်တင်ပေးသည်။ အလားတူပင်၊ HER2၊ mucin 1 နှင့် TEM8 ကဲ့သို့သော TAA များ A2AR ဆုံးရှုံးမှုနှင့် ဖြိုခွဲခြင်းသည် ကင်ဆာဆဲလ်များကို သတ်ရာတွင် CAR-T ဆဲလ်များ၏ ထိရောက်မှုကို မြှင့်တင်ပေးသည်။ CRISPR/Cas9-driven T cell screening တွင် p38 kinase ပျက်ယွင်းခြင်းသည် T cell antitumor လုပ်ဆောင်ချက်ကို မြှင့်တင်ပေးကြောင်း ပြသထားသည်။ CRISPR/Cas9 မှ ပြုပြင်ထားသော T ဆဲလ်များသည် TCR (T cell receptor) ၏ ဖော်ပြမှုကို တိုးမြှင့်ပေးပြီး T ဆဲလ်များတွင် antitumor လုပ်ဆောင်ချက် ရှိလာစေသည်။
ကိုယ်ခံစွမ်းအားကုထုံး၏ ရည်ရွယ်ချက်မှာ ကင်ဆာဆဲလ်များကို တိုက်ခိုက်ရန် ကိုယ်ခံအားစနစ်ကို လှုံ့ဆော်ရန်ဖြစ်သည်။ ကိုယ်ခံအားစစ်ဆေးရေးဂိတ်ပရိုတိန်းများ အလွန်အကျွံဖော်ပြခြင်းသည် ကိုယ်ခံအားတုံ့ပြန်မှုများကို များသောအားဖြင့် ကာကွယ်ပေးသော်လည်း ကင်ဆာများကို ၎င်းတို့ကို ရှောင်ရှားရန် ကူညီပေးနိုင်ပါသည် (Topalian et al., 2015)။ ဤပရိုတိန်းများသည် ကိုယ်ခံအားဆဲလ်များ၏ မျက်နှာပြင်ပေါ်ရှိ receptors များနှင့် ချိတ်ဆက်ခြင်းဖြင့် ကိုယ်ခံအားတုံ့ပြန်မှုများကို ကာကွယ်ပေးသည်။ စစ်ဆေးရေးဂိတ်ပရိုတိန်းများစွာ (CD155 နှင့် PD-L1 ကဲ့သို့) သည် ကိုယ်ခံအားဆဲလ်များပေါ်ရှိ PD-1 receptor ကို ပစ်မှတ်ထားပြီး ရင်သားကင်ဆာ၊ အထူးသဖြင့် TNBC တွင် ဖော်ပြသည် (Li Y.-C. et al., 2020)။ CRISPR/Cas9 ကို အသုံးပြု၍ PD-L1 သို့မဟုတ် ၎င်း၏ receptor ကို ဖြုတ်ချခြင်းသည် TNBC အကျိတ်များကို တိုက်ခိုက်ရန် ကိုယ်ခံအားစနစ်ကို လှုံ့ဆော်ပေးနိုင်သည် (Yahata et al., 2019)။ ထို့အပြင်၊ CDK5 ၏ CRISPR/Cas9 မှတစ်ဆင့် ဖျက်ခြင်းဖြင့် PD-L1 ဖော်ပြမှုကို လျှော့ချခြင်းသည် in vitro နှင့် in vivo အကျိတ်ကြီးထွားမှုကို တားဆီးပေးသည်ဟု ပြသထားသည် (Deng et al., 2020)။ ရင်သားကင်ဆာ၏ in vitro နှင့် in vivo မော်ဒယ်များတွင် ကြီးထွားမှုကို တားဆီးခြင်းက CD155 ၏ shRNA မှတဆင့် လျှော့ချခြင်းသည် ရင်သားကင်ဆာအပေါ် ကုထုံးဆိုင်ရာ အကျိုးသက်ရောက်မှုရှိနိုင်ကြောင်း အကြံပြုထားသည် (Gao et al., 2018)။
CAR T ဆဲလ်များသည် အကျိတ်နှင့်ဆက်စပ်သော antigens (TAAs) ကို မှတ်မိသော CARs များကို ဖော်ပြပြီး ၎င်းတို့၏ လုပ်ဆောင်ချက်ကို မြှင့်တင်ရန် checkpoint proteins များကို knockdown လုပ်နိုင်သည် (Li C. et al., 2020)။ ရင်သားကင်ဆာတွင် CAR T ဆဲလ်ကုထုံးအတွက် အလားအလာရှိသော targets အမျိုးမျိုးရှိပြီး HER2၊ mucin1 နှင့် TEM8 ကဲ့သို့သော TAAs အများအပြားပါဝင်သည် (Bajgain et al., 2018)။ mesothelin (TNBC BT-459 ဆဲလ်များတွင် အလွန်အကျွံဖော်ပြခြင်း) ကို ပစ်မှတ်ထားသော CAR T ဆဲလ်များသည် CRISPR/Cas9 ကို အသုံးပြု၍ PD-1 ကို knock out လုပ်သောအခါ ကင်ဆာကို ပိုမိုထိရောက်ကြောင်း အထောက်အထားများရှိသည် (Hu et al., 2019)။ သို့သော် လူနာများထံမှ T ဆဲလ်များကို ခွဲထုတ်ပြီးနောက် ex vivo ကို တည်းဖြတ်ခြင်းသည် လုပ်အားများစွာအသုံးပြုပြီး အချိန်ကုန်သော လုပ်ငန်းစဉ်တစ်ခုဖြစ်သည်။ universal T ဆဲလ်များသည် isolation လိုအပ်ချက်များကို လျှော့ချနိုင်သော်လည်း၊ graft-versus-host abnormalities များကို ကာကွယ်ရန် human leukocyte antigen (HLA) class I နှင့် T cell receptor (TCR) ကို ဖော်ပြသော donor T ဆဲလ်များကို ဖယ်ရှားသင့်သည် (Ren et al., 2017). , 2017a)။ CRISPR/Cas9 ကိုအသုံးပြုခြင်းဖြင့် HDR သည် TCR နှင့် HLA ကိုတစ်ပြိုင်နက်တည်းဖယ်ရှားနိုင်ပြီး CAR ကို encoding လုပ်သည့် gene ကို ဖြုတ်ချနိုင်သည်။ CRISPR/Cas9 ကို anti-CD19 CAR များကို TCR locus ထဲသို့ထည့်သွင်းရန်အသုံးပြုနိုင်ပြီး T ဆဲလ်များကို မပျက်စီးစေဘဲ CAR များကို ထိရောက်စွာထုတ်လုပ်နိုင်ကြောင်း လေ့လာမှုများကပြသထားသည် (Dimitri et al., 2022)။ Multiplex နည်းပညာများကို allogeneic CAR T ဆဲလ်များထုတ်လုပ်ရန် တီထွင်ထားပြီး TNBC ကိုဆန့်ကျင်သော TCR၊ beta-2-microglobulin (B2M)၊ HLA-I subunit နှင့် PD-1 နှင့် CTLA-4 ကဲ့သို့သော အခြားပရိုတင်းများကို တစ်ပြိုင်နက်တည်းဖယ်ရှားခြင်းဖြင့် တီထွင်ထားပြီးဖြစ်သည် (Eyquem et al., 2017; Liu et al., 2017; Ren et al., 2017b; Dimitri et al., 2022)။
CRISPR/Cas9 ကိုအသုံးပြုခြင်းဖြင့် CAR-T ဆဲလ်များ၏ထိရောက်မှုကိုတိုးတက်စေနိုင်သည်။ Adenosine သည် ကိုယ်ခံအားနှိမ်နင်းနိုင်သောဂုဏ်သတ္တိများရှိသည်ဟုလူသိများပြီး T ဆဲလ်လုပ်ဆောင်ချက်ကိုပိတ်ဆို့ခြင်းနှင့် adenosine A2A receptors (A2AR) ကိုအသက်ဝင်စေခြင်းဖြင့် ကင်ဆာရောဂါတိုက်ဖျက်ရေးကိုယ်ခံအားကိုလျှော့ချနိုင်သည် (Vigano et al., 2019)။ CRISPR/Cas9 ကိုအသုံးပြု၍ A2AR ကိုတိတ်ဆိတ်စေခြင်းသည် in vivo တွင် CAR-T ဆဲလ်များ၏ထိရောက်မှုကိုသိသိသာသာတိုးတက်စေသည် (Giuffrida et al., 2021)။ T ဆဲလ်များသည်ဆဲလ်ချဲ့ထွင်ခြင်း၊ ကွဲပြားခြင်း၊ အောက်ဆီဒေးရှင်းဖိစီးမှုနှင့် မျိုးရိုးဗီဇဖိစီးမှုကဲ့သို့သော phenotypic ဝိသေသလက္ခဏာများစွာကိုပြသသည်ဟုလူသိများသည်။ CRISPR/Cas9-based T cell screening သည် T cell receptor kinases ၂၅ မျိုးပျက်စီးမှုကိုဖော်ထုတ်ခဲ့သည်။ ၎င်းတို့အနက် p38 kinase ကိုဖျက်ခြင်းသည် T ဆဲလ်များ၏ antitumor activity ကိုမြှင့်တင်ပေးသည်ဟုပြသထားပြီး p38 kinase သည် CAR-T ဆဲလ်ထိန်းညှိမှု၏အဓိကထိန်းညှိပေးသူဖြစ်ကြောင်းညွှန်ပြသည် (Gurusamy et al., 2020)။
T ဆဲလ်များကို CRISPR/Cas9 ကို အသုံးပြု၍ မျိုးရိုးဗီဇပြုပြင်ပြီး မြင့်မားစွာဖော်ပြသော TCR များကို ထုတ်လုပ်နိုင်သည်။ မျိုးရိုးဗီဇပြုပြင်ထားသော T ဆဲလ်များကို လူနာများထံ လွှဲပြောင်းပေးခြင်းသည် endogenous T ဆဲလ်များထက် ပိုမိုအားကောင်းသော ကင်ဆာဆန့်ကျင်ရေး လုပ်ဆောင်ချက်ကို ပြသခဲ့သည်။ ထို့ကြောင့် endogenous TCR များသည် လူနာများတွင် မျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲထားသော TCR များနှင့် ယှဉ်ပြိုင်နိုင်ပြီး ၎င်းသည် ကင်ဆာကိုယ်ခံအားကုထုံး၏ အလားအလာကို သက်ရောက်မှုရှိနိုင်သည်။ ဤပြဿနာကို ကျော်လွှားရန်အတွက် CRISPR/Cas9 ကို အသုံးပြု၍ လက်ခံဆဲလ်များရှိ endogenous TCR-β ကို ဖယ်ရှားပြီးနောက် TCR-β T ဆဲလ်များကို ကင်ဆာလူနာများထံ လွှဲပြောင်းပေးခြင်းသည် endogenous TCR လိင်ပိုင်းဆိုင်ရာ ယှဉ်ပြိုင်မှု မလိုအပ်ဘဲ ပိုမိုကောင်းမွန်သော ကင်ဆာဆန့်ကျင်ရေး ကိုယ်ခံအားတုံ့ပြန်မှုများကို ပြသနိုင်သည် (Fan et al. 2018)။ ထို့ကြောင့် CRISPR-modified T ဆဲလ်များမှလွဲ၍ TCR များသည် ပုံမှန် TCR-transduced T ဆဲလ်များထက် အကျိတ်အင်တီဂျင်များကို အဆတစ်ထောင် ပိုမိုထိခိုက်လွယ်သည်။ ထို့အပြင်၊ သွေးကင်ဆာအမျိုးမျိုးတွင်၊ γδ TCR+ CRISPR မှ ထုတ်လုပ်သော ပြောင်းလဲထားသော T ဆဲလ်များသည် စံ TCR လွှဲပြောင်းမှုထက် CD4+ နှင့် CD8+ T ဆဲလ်များ၏ ပိုမိုမြင့်မားသော ဖော်ပြမှုကို ပြသသည် (Legut et al., 2018)။ ထို့ကြောင့် CRISPR/Cas9 မှထုတ်လုပ်သော ပြုပြင်ထားသော T ဆဲလ်များသည် TNBC ကိုကျော်လွှားရန် ထိရောက်သော ကိုယ်ခံအားကုထုံးနည်းလမ်းတစ်ခု ဖြစ်နိုင်သည်။
အင်တီဂရင်များသည် ဆဲလ်အမြှေးပါးများတွင် ရှိနေပြီး ဆဲလ်များ၏ တွယ်ကပ်မှုကို မြှင့်တင်ပေးသည့် ဆဲလ်ကပ်ငြိမှု မော်လီကျူးများဖြစ်သည် (Hamidi နှင့် Ivaska၊ ၂၀၁၈)။ အင်တီဂရင်များ ပျက်ယွင်းသွားခြင်းသည် ဆဲလ်ပြင်ပ မက်ထရစ်ကို ပြောင်းလဲခြင်းဖြင့် ကင်ဆာဖွံ့ဖြိုးမှုနှင့် ရွှေ့ပြောင်းခြင်းနှင့် ဆက်စပ်နေပြီး သွေးလည်ပတ်မှုတွင် ကင်ဆာဆဲလ်များ ရှင်သန်မှုကို ဖြစ်စေသည် (Hamidi နှင့် Ivaska၊ ၂၀၁၈)။ CRISPR/Cas9-mediated integrin knockdown သည် TNBC တွင် အကျိတ်တိုးတက်မှု၊ metastasis နှင့် colonization တို့ကို နှေးကွေးစေသည်။ integrin a5 (ITGA5) ကို knockdown လုပ်ခြင်းသည် အဆုတ်ကင်ဆာကဲ့သို့သော အခြားကင်ဆာများတွင် ဆဲလ်ရွှေ့ပြောင်းမှုနှင့် တိုးတက်မှုကို လျှော့ချပေးသည်ဟု သတင်းပို့ထားသည် (Ju et al., ၂၀၁၇)၊ integrin a5 သည် TNBC ၏ pathogenesis တွင် အဓိကအချက်တစ်ခု ဖြစ်နိုင်ကြောင်း အကြံပြုထားသည်။
ရိုးရာသန္ဓေသားပင်မဆဲလ် (ES) နည်းလမ်းများကိုအသုံးပြု၍ knockout ကြွက်များထုတ်လုပ်ခြင်းသည် လုပ်အားများစွာအသုံးပြုရပြီး အချိန်ကုန်ကာ ထိရောက်မှုမရှိသော လုပ်ငန်းစဉ်တစ်ခုဖြစ်သည်။ homologous recombination မှတစ်ဆင့် ES ဆဲလ်များကိုပစ်မှတ်ထားရန်၊ chimeric ကြွက်များကိုမွေးမြူပြီးနောက် heterozygous ကြွက်များနှင့်ပေါင်းစပ်ကာ homozygous သားစဉ်မြေးဆက်များထုတ်လုပ်ရန် လပေါင်းများစွာနှင့်နှစ်ပေါင်းများစွာကြာသည်။ မျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုများစွာရှိသောကြွက်များကိုဖန်တီးရန် ရှုပ်ထွေးသော crossbreeding လိုအပ်သည်။ သို့သော် CRISPR/Cas9 ကို အသုံးပြု၍ ES ဆဲလ်များကိုဖယ်ရှားခြင်း သို့မဟုတ် CRISPR/Cas9 အစိတ်အပိုင်းများကို single-cell မျိုးအောင်ထားသောဥများထဲသို့ microinjecting ဖြင့်ထုတ်လုပ်သောကြွက်များကိုအသုံးပြုသောအခါ ပြဿနာများစွာပေါ်ပေါက်လာခဲ့သည်။ ဥပမာအားဖြင့်၊ ပြောင်းလဲမှုများသည် biallelic loci တွင်မကြာခဏဖြစ်ပေါ်လေ့ရှိပြီး မျိုးဗီဇသီးသန့်မဟုတ်ပါ။ CRISPR/Cas9 နည်းပညာကိုအသုံးပြုသော ES ဆဲလ်များသည် မျိုးဗီဇ ၅ ခုအထိ biallelic mutations များကိုတစ်ပြိုင်နက်တည်းထည့်သွင်းနိုင်ကြောင်း မကြာသေးမီကသတင်းပို့ခဲ့သည် (Nishizono et al., 2021)။ ဤရည်ရွယ်ချက်အတွက် Cas9 mRNA နှင့် မျိုးဗီဇသီးသန့် gRNA ငါးခုကို ES ဆဲလ်များထဲသို့တစ်ပြိုင်နက်တည်း transfect လုပ်ခဲ့သည်။ ဒါက ဒီလုပ်ထုံးလုပ်နည်းရဲ့ အလားအလာနဲ့ ထိရောက်မှုကို မီးမောင်းထိုးပြပေမယ့် ဒီမျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုတွေဟာ ငါးခုမြောက် knockout ကြွက်တွေထုတ်လုပ်ဖို့ မွေးမြူခဲ့တုန်းက လက်ဆင့်ကမ်းလာခဲ့တာဖြစ်နိုင်ပါတယ်။ လေ့လာမှုမှာ အံ့သြစရာကောင်းတဲ့ တွေ့ရှိချက်တစ်ခုကိုလည်း တင်ပြထားပါတယ်- ES ဆဲလ်တွေဟာ မျိုးရိုးဗီဇပြုပြင်ထားတဲ့ ကြွက်တွေကို ဖန်တီးဖို့ မလိုအပ်တော့ပါဘူး။ အဲဒီအစား၊ သတ်မှတ်ထားတဲ့ မျိုးရိုးဗီဇထုတ်ကုန်တွေကို ဖယ်ရှားဖို့အတွက် Cas9 mRNA နဲ့ gRNA ကို single-cell အဆင့် သန္ဓေသားတွေထဲကို ထိုးသွင်းခဲ့ပါတယ်။ ရလဒ်အနေနဲ့ knockout founder မျဉ်းတွေကို ဖန်တီးခဲ့ပြီး ကြွက်တွေမှာ မျိုးရိုးဗီဇဖျက်ခြင်းရဲ့ အကျိုးဆက်တွေကို လေ့လာဖို့ သီအိုရီအရ အသုံးပြုနိုင်ပါတယ် (Qin et al., 2016)။ ဒါကြောင့် CRISPR/Cas9 ဟာ ရိုးရာမျိုးရိုးဗီဇအင်ဂျင်နီယာထက် ကုန်ကျစရိတ်နည်းတဲ့ TNBC ကို ကုသဖို့ transgenic ကြွက်တွေ ဖန်တီးခွင့်ပြုပါတယ်။ CRISPR/Cas စနစ်ကို အသုံးပြုပြီး TNBC မှာ endogenous မျိုးရိုးဗီဇတစ်ခု ဒါမှမဟုတ် တစ်ခုထက်ပိုတဲ့ မျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုတွေကို အောင်မြင်စွာ မိတ်ဆက်ပေးနိုင်တဲ့ knockout mouse မော်ဒယ်အသစ်တစ်ခုကို တီထွင်ထုတ်လုပ်ထားပါတယ်။ ဤသဘောတရားအပေါ်အခြေခံ၍ TNBC ၏ တိရစ္ဆာန်မော်ဒယ်များကို CRISPR/Cas9-mediated BRCA1 နှင့် p53 ဖျက်ခြင်းကို အသုံးပြု၍လည်း တီထွင်နိုင်ပြီး၊ HR ပြုပြင်မှု ဆုံးရှုံးမှု၊ မျိုးရိုးဗီဇ မတည်ငြိမ်မှုနှင့် မျိုးဗီဇပြောင်းလဲခြင်း phenotype များကို ဖြစ်ပေါ်စေသည် (Annunziato et al., 2020)။
လက်ရှိတွင် mammography၊ magnetic resonance imaging (MRI) နှင့် ultrasound ကဲ့သို့သော နည်းလမ်းအမျိုးမျိုးကို TNBC ရောဂါရှာဖွေရန် အသုံးပြုကြသည်။ သို့သော် ဤနည်းလမ်းများတွင် ကန့်သတ်ချက်အချို့ရှိသည်။ Mammography ကို ကင်ဆာဆဲလ်များသည် အခြားကိုယ်တွင်းအင်္ဂါများသို့ ရွှေ့ပြောင်းသွားသည့် metastases များအစား ဒေသတွင်းရင်သားတစ်ရှူးများကို ရောဂါရှာဖွေရန် အသုံးပြုသည်။ TNBC ရောဂါရှာဖွေရန်အတွက် Ultrasonography သည် ယုံကြည်စိတ်ချရသော နည်းလမ်းတစ်ခု မဟုတ်ပါ (Chen နှင့် Lee-Felker၊ ၂၀၂၃)။ MRI သည် ultrasound နှင့် mammography ထက် sensitivity ပိုမိုမြင့်မားသော်လည်း ၎င်း၏ ရောဂါရှာဖွေတိကျမှုမှာ အကန့်အသတ်ရှိသည် (Sha နှင့် Chen၊ ၂၀၂၂)။ တစ်ရှူး biopsy သည် ကင်ဆာဆဲလ်များကို ဖော်ထုတ်ရန် ကျူးကျော်ဝင်ရောက်သည့် နည်းလမ်းတစ်ခုဖြစ်သည်။ သို့သော် အချို့ကိစ္စများတွင် အပ်သည် စိတ်ဝင်စားသည့်နေရာမှ လွဲချော်သွားပါက biopsy သည် ကင်ဆာတစ်ရှူးကို လွတ်သွားနိုင်သည်။ ထို့အပြင် ၎င်းသည် အလွန်စျေးကြီးပြီး လူနာအတွက် စိတ်ဒဏ်ရာရစေနိုင်သည်။ TNBC သည် ကွဲပြားသောကင်ဆာအမျိုးအစားဖြစ်သောကြောင့် biopsy သည် ကင်ဆာအမျိုးအစားအကြောင်း လုံလောက်သော အချက်အလက်များကို မပေးနိုင်ပါ။ ထို့ကြောင့် TNBC ကို ရှာဖွေတွေ့ရှိရန်အတွက် ရောဂါရှာဖွေရာတွင် ယုံကြည်စိတ်ချရသော နည်းလမ်းအသစ်တစ်ခု အရေးတကြီးလိုအပ်ပါသည်။ CRISPR/Cas9 သည် ရင်သားကင်ဆာရောဂါရှာဖွေရာတွင် အလွန်အာရုံခံနိုင်စွမ်းရှိပြီး အနည်းဆုံးကျူးကျော်ဝင်ရောက်နိုင်သော အခြားရွေးချယ်စရာတစ်ခုအဖြစ် ဆောင်ရွက်နိုင်ပါသည်။ ဤရည်ရွယ်ချက်အတွက်၊ TNBC ရောဂါရှာဖွေရန်အတွက် CRISPR/Cas9-based ဗျူဟာများကို အသုံးပြု၍ PCR နည်းလမ်းများကို တိုးတက်ကောင်းမွန်အောင် ပြုလုပ်နိုင်ပါသည်။ ပထမဦးစွာ၊ CRISPR စနစ်၏ Cas9 နှင့် cpf1 ပရိုတိန်းများကို တိကျမှုမရှိသော DNA ကို ဖယ်ရှားရန် အသုံးပြုပြီးနောက် ဤပရိုတိန်းနှစ်ခု (Cas9 နှင့် cpf1) သည် ပစ်မှတ် DNA နှင့် မချိတ်ဆက်မီ PAM အစီအစဉ်ကို မှတ်မိနိုင်သည် (Deepak Singh et al., 2021)။ ထို့ကြောင့် PCR သည် ကင်ဆာဖွံ့ဖြိုးမှုနှင့် ဆက်စပ်နေသော မျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုများကို ဖော်ထုတ်နိုင်သည်။ လေ့လာမှုများစွာသည် မတူညီသောကင်ဆာများတွင် မတူညီသော မျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုများကို ထောက်လှမ်းရန် ဤ CRISPR-based ဗျူဟာကို အသုံးပြုခဲ့ကြသည် (Safari et al., 2019)။ ထို့ကြောင့်၊ CRISPR-based PCR နည်းလမ်းများသည် TNBC ရောဂါရှာဖွေခြင်း၏ biopsy-based immunohistochemistry ကဲ့သို့သော ကျူးကျော်ဝင်ရောက်နိုင်သော နည်းလမ်းများအပေါ် မှီခိုမှုကို လျှော့ချနိုင်သည်။
ဟော်မုန်း receptor ထိန်းညှိမှုတွင် မျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုများကို TNBC တွင်လည်း သရုပ်ပြခဲ့သည် (Chen and Russo, 2009)။ စောင့်ရှောက်မှုနေရာများတွင် ရောဂါရှာဖွေရေးအတွက် microarrays များကိုအသုံးပြုသည့် CRISPR/Cas9-based PCR ဗျူဟာများသည် ဤမျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုများကို ထိရောက်စွာ စောင့်ကြည့်နိုင်သည် (Hajian et al., 2019)။ ၎င်းသည် ကျန်းမာရေးစောင့်ရှောက်မှုပေးသူများအား TNBC လူနာများတွင် သီးခြားမျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုများအကြောင်း သက်ဆိုင်ရာအချက်အလက်များကိုလည်း ပေးစွမ်းနိုင်ပြီး ၎င်းတို့၏ ကုသမှုလမ်းကြောင်းကို တိုးတက်ကောင်းမွန်စေရန် ကူညီပေးနိုင်ပါသည်။ သို့သော် ဤပေါင်းစပ်နည်းပညာတွင် ကန့်သတ်ချက်များရှိသည်။ ထို့ကြောင့် TNBC ရောဂါရှာဖွေရန်အတွက် ကျန်းမာရေးစောင့်ရှောက်မှုတွင် ဤ CRISPR/Cas-PCR နည်းလမ်းကို အသုံးမပြုမီ ကျယ်ပြန့်သော သုတေသနလုပ်ငန်းများ လိုအပ်ပါသည် (Yang et al., 2019)။
ပို့စ်တင်ချိန်: ၂၀၂၄ ခုနှစ်၊ အောက်တိုဘာလ ၁၄ ရက်